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猪圆环病毒病、猪乙型脑炎和猪细小病毒病均能引起猪的繁殖障碍，且目前多表现为混合感染或继发感染，给养猪业带来了巨大的经济损失。疫苗免疫接种是防控这三种传染病的主要和有效措施，但市场上仅有商品化单苗。随着规模化养殖的发展，猪场免疫接种工作量的加大，使用单苗进行免疫费时、费力,而且对动物造成很大应激，影响免疫效果。因此，现代规模化养殖生产中，迫切需要能够简化免疫程序，一针多防的联苗。本研究以研制猪圆环病毒病-乙型脑炎-细小病毒病三联灭活疫苗为目标，完成了以下研究工作：一．建立了基于PCV2Cap蛋白的间接ELISA方法。用PCR方法获得截短的猪圆环病毒2型orf2基因，经酶切后克隆至原核表达载体pET28a后，在终浓度为40μM IPTG，30℃下诱导表达3h后，经SDS-PAGE分析，目的基因得到正确表达，大小约为24KDa左右，表达产物以可溶性表达为主；Western bloting检测证实其具有免疫反应活性。以纯化的Cap蛋白为包被抗原，建立了检测PCV2抗体的间接ELISA方法。建立的ELISA方法的最佳反应条件是：抗原最适包被量为2μg/孔，包被时间为37℃包被1h后4℃过夜；血清工作浓度为1:200，作用时间为1h；二抗选用HRP标记的兔抗猪IgG，稀释度为1:2000，作用时间为1h；显色液TMB作用时间为15min；判定标准为，样品OD450值大于或等于0.211判定为阳性，小于0.211判定为阴性。所建ELISA方法具有良好特异性，重复性和准确性。对120份疑似猪PCV2血清样品进行检测，结果显示，该方法与PCV2商品化试剂盒检测结果有较高的符合率。本研究所建立间接ELISA方法可用于PCV2抗体检测和流行病学调查。二．制备了猪圆环病毒病-乙型脑炎-细小病毒病三联灭活疫苗并在试验动物模型上对其免疫原性进行研究。利用分离鉴定的猪圆环病毒2型XX株、猪乙型脑炎病毒XX株与猪细小病毒XX株，制备三联灭活疫苗及相应的单苗和二联苗。对制备的疫苗进行物理性状、无菌检验和安全检验后，免疫昆明鼠和BALB/c小鼠，进行抗体持续期试验，肌内免疫和皮下免疫的免疫效果对比试验以及攻毒保护试验；免疫豚鼠，进行免疫原性试验及肌内免疫和皮下免疫的免疫效果对比试验。结果显示：试制三联灭活苗在免疫昆明鼠后，诱导的乙型脑炎病毒抗体在首免后八周达到高峰，峰值要优于相应单苗、二联苗和商品苗；三联苗免疫BALB/c小鼠后，诱导产生的PCV2抗体在首免后六周达到高峰，且抗体水平要高于相应单苗；三联苗免疫豚鼠后，诱导产生的猪细小病毒抗体在首免后四周已具有保护力，在首免后八周达到高峰，峰值高于相应单苗、二联苗和商品苗；两种免疫途径对比试验结果显示，肌内免疫要优于皮下免疫；攻毒保护试验结果显示，所制备三联灭活疫苗对猪乙型脑炎强毒攻击的昆明鼠可以提供70%的保护，对猪圆环病毒攻击的BALB/c小鼠可以提供完全保护。