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目的:本课题探讨瘦素(Leptin)上调乳腺癌细胞脂肪酸代谢关键酶表达及其对增殖、迁移及侵袭能力的影响,探讨其可能的分子机制,以期从脂代谢视角,丰富乳腺癌发病机理和发现新的治疗靶点提供实验依据。方法:1.采用蛋白印迹法(Western Blot,WB)和免疫荧光法(immunofluorescence,IF)检测乳腺癌细胞株MCF-7,T47D的Leptin长、短受体(Ob-Rb,Ob-Rt)的表达,CCK-8试验检测Leptin对乳腺癌细胞增殖能力的影响,划痕试验和Transwell试验检测乳腺癌细胞侵袭及迁移能力的变化。2.实时荧光定量PCR芯片(real-time fluorescence quantitative PCR array,QRT-PCR array)检测Leptin作用乳腺癌细胞株MCF-7后的基因表达谱差异,并筛选出表达差异较大的候选基因乙酰辅酶A转移酶2(ACAT2),采用Western Blot和QRT-PCR验证ACAT2蛋白和基因水平变化。3.采用ACAT2特异性抑制剂PPPA(Pyripyropene A)作用乳腺癌细胞株MCF-7、T47D,观察Leptin对两株乳腺癌细胞增殖能力、侵袭和迁移能力的影响;westernblot检测leptin对两株乳腺癌细胞增殖相关的标志分子(c-myc、cylind1)表达的影响。4.采用jak/stat3,mapk/erk,pi3k/akt信号通路抑制剂处理乳腺癌细胞株mcf-7,t47d,通过检测两株乳腺癌细胞acat2及其转录因子srebp2表达的变化,探讨leptin作用乳腺癌细胞的相关信号通路和可能的分子机制。结果:1.wb和if结果表明,乳腺癌细胞株mcf-7,t47d均表达ob-rb,ob-rt;cck8试验结果显示,leptin处理后乳腺癌细胞数目明显增多(p<0.05),表明leptin能够明显增强乳腺癌细胞的增殖能力;划痕试验结果显示,leptin处理组细胞愈合能力较对照组明显增强(p<0.05),表明leptin促进细胞迁移;transwell试验结果显示,leptin处理后穿膜细胞数增多,表明leptin能够促进乳腺癌细胞侵袭(p<0.05)。2.qrt-pcrarray结果显示,与对照组相比,leptin处理mcf-7细胞后acat2基因表达明显上调(p<0.05);qrt-pcr及wb验证结果表明,leptin所致mcf-7,t47d细胞中acat2的表达明显升高,且呈时间浓度依赖性。3.细胞中acat2活性被特异性抑制剂pppa抑制后,cck8试验、划痕试验及transwell试验结果显示,leptin促mcf-7,t47d细胞增殖、迁移及侵袭作用均被抑制,乳腺癌细胞增殖相关标志分子c-myc和cylind1表达也被明显抑制。4.阻断pi3k/akt信号通路后,leptin促进acat2和srebp2蛋白表达作用被抑制;阻断JAK/STAT3和MAPK/ERK信号通路则对Leptin上调ACAT2和SREBP2蛋白表达作用无影响。结论:1.Leptin促进乳腺癌细胞株MCF-7,T47D增殖、侵袭及迁移,可能与Leptin上调乳腺癌细胞脂肪酸代谢酶ACAT2的表达相关。2.Leptin上调脂肪酸代谢相关的ACAT2的表达,其机制可能与Leptin激活细胞内PI3K/AKT信号途径有关。