C-反应蛋白（C-reactive protein,CRP）是一种典型的急性期血浆蛋白,在急性期CRP血浆浓度升高近1000倍,与多种慢性疾病有关,在临床上常作为非特异性炎症标识物广泛用于检测。CRP是由五个相同的亚基以非共价方式组装而成的五聚体蛋白,每个亚基由206个氨基酸组成,亚基内36Cys和97Cys形成二硫键,其识别面包括PCh结合位点和Ca²⁺离子结合位点,效应面具有C1q结合位点。我们将CRP编码基因在真核细胞COS-7中表达,成功获得了分泌型天然五聚体CRP,之后对CRP重要结构N端、C端、二硫键、α螺旋、离子键、Ca²⁺离子结合位点的相关氨基酸进行定点突变以及在亚基间引入二硫键,构建了不同突变体转染到COS-7细胞中表达,通过ELISA和Western blotting检测结果发现:亚基间引入二硫键的突变体结果表明CRP亚基在胞内折叠和组装是两个独立的过程,N端aa1-31引导下,aa32-101疏水核心形成,aa168-176α螺旋的正确形成和定位帮助二硫键的形成和稳定;后续折叠依赖于二硫键的完整性,二硫键形成可能是对所在结构域1和6β折叠片的锁定;Ca²⁺离子参与天然结构CRP的形成,其中61N、138E、139Q、140D、150Q为Ca²⁺结合位点的必需氨基酸,离子键主要参与亚基的组装过程,其中118R-155D是主要作用力。根据以上结果我们得到了CRP在真核细胞内结构形成的大体过程:CRP先折叠后组装成五聚体,在N端引导下,形成aa32-101疏水核心,α螺旋的正确形成和定位,共同推动了二硫键的形成;亚基进一步折叠;最后,Ca²⁺离子结合位点形成,亚基完成组装过程。