目的:以大鼠为实验对象,研究肝细胞的分离制备的方法.观察短期培养过程中肝细 胞活率、形态和功能的变化.探讨冷冻复苏及降温速率对肝细胞的影响.为肝细胞移植所需"肝细胞库"的建立奠定实验基础.结论:1.采用改良Seglen门静脉-下腔静脉双插管交替 循环灌注法分离获取游离肝细胞产率高、活性好、纯度高.2.在一定 培养条件下,分离的 肝细胞经体外短期培养,可一定程度地恢复因分离消化作用造成的损伤,并能很好地维持正常肝细胞特性.3.分离的肝细胞可作为肝细胞移植研究及肝细胞冷藏复苏研究较好的生物材料.4.冷冻复苏过程使细胞膜完整性受损、细胞浆内容丢失导致细胞在复苏后活率降低、细胞功能丧失.5.降温速率的快慢直接关系冻存肝细胞 的效果,理想的降温速率可以有效的 提高复苏后细胞的活率与细胞功能.但最适的降温程序仍有待进一步的研究与探讨.6.冷冻对肝细胞的损伤是多种因素的综合作用,但减少在降温和解冻复苏过程 对肝细胞膜的损伤 是成功冷藏肝细胞的关键之一.7.肝细胞在液氮中保存,其活率及蛋白质合成功能并不随保存时间的延长而降低.