目的:　　 1.为了建立甘丙肽转基因小鼠进一步研究甘丙肽的功能，对甘丙肽基因进行了克隆构建了神经特异表达甘丙肽转基因载体，获得了显微注射用甘丙肽基因片段，从而为进一步建立过量表达甘丙肽的转基因小鼠模型奠定基础。　　 2.为了得到大而清晰的受精卵雄性原核，对受精卵最佳显微注射时间进行了探索，为下一步显微注射做好准备。　　 方法:　　 第一部分、从小鼠脑组织中提取出总RNA和基因组DNA，应用RT-PCR技术，得到甘丙肽的cDNA编码区，应用PCR技术得到甘丙肽5非翻译区和3非翻译区。应用重叠延伸PCR技术，得到甘丙肽目的基因。将其与T载体连接，经酶切鉴定无误后，送公司测序，命名为pMD19T-GAL。双酶切重组质粒pMD19T-GAL，获得目的基因。将目的基因连接到质粒pUC18上，命名为pUC18-GAL。在重组质粒pUC18-GAL中甘丙肽的上游插入PDGFB-链启动子，将鉴定正确的重组质粒命名为PDGF-GAL，提示构建神经特异表达甘丙肽转基因载体成功。双酶切重组质粒PDGF-GAL，得到显微注射用甘丙肽基因片段，回收纯化后即可用于显微注射。　　 第二部分、采用孕马血清促性腺激素(pregnant mareserum gonadotropin，PMSG)和人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotrophin，HCG)对4-6周龄的雌性小鼠进行超数排卵，在注射人绒毛膜促性腺激素后不同的时间点获取受精卵，观察受精卵的发育状态，从而选择最佳的受精卵的显微注射时间。　　 结果:　　 通过重叠延伸PCR的方法得到的甘丙肽目的基因，经测序鉴定后，其序列同GenBank中甘丙肽的基因序列相同。经酶切鉴定证明神经特异表达甘丙肽转基因载体构建成功，得到了显微注射用甘丙肽基因片段，经浓度纯度测定后可用于下一步显微注射。　　 在注射HCG后的20-25小时，随着时间的推移，出现受精卵雄原核的比例逐渐增加。注射HCG后的26小时开始，受精卵出现雄性原核的比例开始下降。在注射hCG后的20-25小时，受精卵的质量随着时间的推移而逐步提高。在注射HCG20、21、22小时后，受精卵雄性原核比较小，在注射HCG后的23、24、25小时，雌雄原核清晰可见，受精卵雄原核较大，位于受精卵的中心，在注射HCG后的26、27、28小时，卵胞质稍微不均质，雄性原核和雌性原核较大而且相互之间比较靠近，位于卵胞质中央，受精卵即将分裂。　　 结论:　　 1.成功构建了神经特异表达甘丙肽转基因载体，获得了显微注射用甘丙肽基因片段，从而为进一步建立过量表达甘丙肽的转基因小鼠模型奠定了基础。　　 2.注射HCG后的25小时，出现雄性原核的受精卵占受精卵总数的比例最大，并且雌雄原核清晰可见，雄原核较大，位于受精卵的中心，最适合显微注射。