【摘 要】
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哈维氏弧菌（Vibrio harveyi）是一种可以感染多种海洋生物并造成严重经济损失的强力致病菌。目前,鱼类疾病防治的主要措施仍然为使用抗生素等药物,但抗生素药物的无序使用已经严重影响了养殖环境和养殖产品质量,有效的免疫防控手段极为重要。最新研究表明,Ⅵ分泌系统（T6SS）在哈维氏弧菌的群体感应系统、生物膜形成、鞭毛合成和细胞毒力等致病相关功能中发挥了重要作用。TssJ是T6SS核心亚基之一,通
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哈维氏弧菌（Vibrio harveyi）是一种可以感染多种海洋生物并造成严重经济损失的强力致病菌。目前,鱼类疾病防治的主要措施仍然为使用抗生素等药物,但抗生素药物的无序使用已经严重影响了养殖环境和养殖产品质量,有效的免疫防控手段极为重要。最新研究表明,Ⅵ分泌系统（T6SS）在哈维氏弧菌的群体感应系统、生物膜形成、鞭毛合成和细胞毒力等致病相关功能中发挥了重要作用。TssJ是T6SS核心亚基之一,通过N末端酰基化的半胱氨酸残基锚定在外膜上的外膜脂蛋白。基于此,本研究从哈维氏弧菌QT520的Ⅵ分泌系统中克隆出候选抗原TssJ,并构建了亚单位疫苗和DNA疫苗,对其产生的免疫保护效应进行了比较研究。本研究以卵形鲳鲹（Trachinotus ovatus）作为实验动物,分别构建了亚单位疫苗r TssJ和DNA疫苗p CTssJ。首先,我们对TssJ的定位进行了分析,Western blot和细菌凝集实验结果均表明,TssJ定位于细胞膜上。免疫实验的结果显示,免疫鱼体一个月后进行哈维氏弧菌的攻毒实验,亚单位疫苗r TssJ和DNA疫苗p CTssJ均可以产生较好的保护作用,其相对免疫保护效率分别为52.39%和69.11%。免疫指标的测定结果显示,亚单位疫苗r TssJ和DNA疫苗p CTssJ均可以提高机体的的酸性磷酸酶（ACP）、碱性磷酸酶（AKP）、超氧化物歧化酶（SOD）和溶菌酶（LZM）活性。抗体水平的检测发现,亚单位疫苗r TssJ和DNA疫苗p CTssJ均可以有效的刺激机体产生抗体,但是亚单位疫苗r TssJ抗体的产生量高于DNA疫苗p CTssJ。免疫相关基因的结果显示,与对照组相比,在亚单位疫苗r TssJ和DNA疫苗p CTssJ的免疫作用下,免疫相关基因IL10、C3、MHCIɑ和Ig M均显著上调,而TNFɑ和Mx只在DNA疫苗p CTssJ的免疫后上调。以上结果表明,相对于亚单位疫苗r TssJ,DNA疫苗p CTssJ能够更强的引起机体的免疫。综上所述,亚单位疫苗rTssJ和DNA疫苗pCTssJ能够有效的提高卵形鲳鲹的免疫能力,针对哈维氏弧菌QT520产生较好的免疫保护作用。本研究结果为鱼类的免疫防控奠定了基础。
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