第一部分　　 研究背景:　　 血管纤维化是高血压病的一个重要特征。去甲肾上腺素(NE)及结缔组织生长因子(CTGF)参与了高血压过程中的血管纤维化。法尼基焦磷酸合成酶(famesylpyrophosphate synthase,FPPS)是甲羟戊酸途径中的一个关键酶,催化合成类异戊二烯化产物的产生包括法尼基焦磷酸(farnesylpyrophosphate,FPP)和拢牛儿栊牛儿焦磷酸(geranylgeranylpyrophosphate,GGPP)。含氮双膦酸盐如阿仑膦酸钠、伊班膦酸钠作为异戊二烯双膦酸脂类类似物特异性地抑制FPPS活性。FPPS在高血压大鼠心肌和血管组织中表达升高,抑制FPPS活性能改善自发性高血压大鼠心肌肥厚及纤维化。　　 目的:本研究主要探索FPPS是否参与了高血压过程中NE介导的血管纤维化,并探讨其可能机制。　　 方法:　　 1)用胶原酶法从10～12周龄WKY、SHR大鼠胸主动脉获得平滑肌细胞(VSMCs)。细胞免疫荧光鉴定细胞。　　 2)VSMCs同步化后加入FPPS抑制剂-伊班膦酸钠(0、5、10μM)或NE(0.01、0.1、1、10μM)共同作用24h,采用CCK-8、Annexin V-FITC检测伊班膦酸钠对VSMCs增殖、凋亡的影响；用Western blot、实时定量PCR检测CTGF、FPPS及Ⅰ型胶原蛋白前体(α-1 procollagenⅠ)表达；羟脯氨酸检测试剂盒测定培养液中羟脯氨酸含量。　　 3)VSMCs同步化后加入5、10μM伊班膦酸钠先孵育2h,然后加入NE(0.01、0.1、1、10μM)共同作用24h,用Western blot检测CTGF表达的变化,羟脯氨酸检测试剂盒测定培养液中羟脯氨酸含量,CCK-8检测细胞增殖。　　 4)SHR-VSMCs同步化后加入10μM伊班膦酸钠及30μM GGOH、30μM FOH或10μM GGTI-286、10μM FTI-276先孵育2h,然后与NE(0.1μM)共同孵育24h,用Western blot检测CTGF表达的变化。　　 5)SHR-VSMCs同步化后加入10μM伊班膦酸钠先孵育24h,然后与NE(0.1μM)共同孵育30 min,用pull down试剂盒和western—blot技术检测Ras活性和Ras总量的变化。　　 6)SHR-VSMCs同步化后加入10μM伊班膦酸钠先孵育24h,然后与NE(0.1μM)共同孵育5 min,用Western blot检测extracellular signal-regulated kinase(ERK1／2),stress-activated protein kinase／c-Jun N-terminal kinase(JNK)和p38磷酸化水平。　　 7)SHR-VSMCs同步化后加入10μM伊班膦酸钠,PD98059(ERK1／2 inhibitor,50μM),SB-203580(p38 MAPK inhibitor,10μM)及SP600125(JNK-1,-2,-3inhibitor,10μM)先孵育2h,然后与NE(0.1μM)共同孵育24h,用Western blot检测CTGF表达的变化。　　 结果:　　 1)倒置相差显微镜观察及细胞免疫荧光证明培养的细胞是平滑肌细胞。　　 2)基础状态下,SHR-VSMCs增殖、CTGF蛋白及mRNA表达、α-1 procollagenⅠmRNA表达、羟脯氨酸分泌、FPPS蛋白及mRNA表达均高于WKY-VSMCs。NE0.01、0.1、1、10μM作用24h,剂量依赖性增加VSMCs增殖、CTGF表达、FPPS表达、α-1 procollagenⅠ表达、羟脯氨酸分泌。与接受相同剂量NE处理的WKY-VSMCs相比,SHR—VSMCs对NE的反应明显增强。　　 3)伊班膦酸钠作为FPPS抑制剂可剂量依赖性抑制NE0.1 gM诱导的SHR-VSMCs增殖,CTGF蛋白表达,羟脯氨酸分泌。伊班膦酸钠单独孵育24h不影响WKY-VSMCs及SHR-VSMCs增殖、CTGF蛋白表达和羟脯氨酸分泌。　　 4)FOH部分逆转了10μM伊班膦酸钠的抗血管纤维化作用,FTI-276模拟了伊班膦酸钠的抗纤维化作用。　　 5)NE0.1μM30min升高SHR-VSMCs Ras活性,10μM伊班膦酸钠预处理24h能下调NE升高的Ras活性。　　 6)NE0.1μM5min升高SHR—VSMCs ERK1／2、p38和JNK磷酸化水平,10μM伊班膦酸钠预处理24h能下调三者磷酸化水平。　　 7)p38MAPK抑制剂SB203580可抑制NE0.1μM诱导的SHR—VSMCs CTGF蛋白表达。　　 结论:　　 1)NE诱导VSMCs增殖、纤维化反应。与WKY-VSMCs相比,SHR-VSMCs对NE的反应明显增强。　　 2)NE诱导VSMCs FPPS表达。与WKY-VSMCs相比,SHR-VSMCs对NE的反应明显增强。　　 3)抑制FPPS活性可以有效逆转NE诱导的血管纤维化反应,这种作用与抑制Ras活化及p38MAPK磷酸化相关。　　 背景:S100A8／A9被广泛地研究并被认为是多种急慢性炎症疾病炎症活动的生物指标。急性心肌梗死(AMI)病人外周血中S100A8／A9急剧升高,参与了冠状动脉粥样硬化性疾病及其并发症的病理过程。然而,急性心肌缺血损伤本身能否诱导S100A8和S100A9在心肌细胞内表达,甚至心肌细胞是否为AMI时外周血升高的S100A8／A9的细胞来源一直未被研究过。　　 第二部分　　 目的:本研究利用大鼠离体心脏灌流全心缺血模型及心肌细胞缺血缺氧模型来探索急性心肌缺血损伤能否诱导S100A8和S100A9在心肌细胞内表达,以明确心肌细胞是否为AMI时外周血升高的S100A8／A9的细胞来源。　　 方法:离体16周龄雄性自发性高血压大鼠(SHR)和正常血压大鼠(WKY)心脏在Langendorff灌流装置上给予不同处理:对照组,改良Krebs Henseleit(K-H)液持续灌流60分钟:缺血30分钟组；缺血60分钟组。此外,通过左冠状动脉结扎方法建立在体AMI模型。乳鼠心肌细胞培养后给予不同时间(0、120、240分钟)缺血缺氧处理。实时荧光定IPCR(qRT-PCR)检测心肌组织S100A8和S100A9 mRNA表达。免疫印迹方法检测心肌组织和心肌细胞中NF-kappa B p65、S100AS和S100A9的蛋白表达。　　 结果:　　 急性心肌缺血损伤本身并未改变大鼠心肌组织中S100A8和S100A9蛋白或mRNA的表达。同样地,乳鼠心肌细胞缺血缺氧后S100A8和S100A9蛋白表达也未发生改变。然而,缺血及缺氧都时间依赖性地增加心肌和心肌细胞中NF-kappa Bp65的蛋白表达。　　 结论:AMI时外周血中升高的S100A8／A9并不是来源于心肌细胞。