脂肪肝出血综合征(FLHS)，又名脂肪肝综合征，是一种营养代谢性疾病。该病主要导致蛋鸡不明原因的产蛋率下降和死亡率上升，鸡肝脏发生脂肪变性、出血，有时导致急性死亡为特征的营养代谢性疾病。FLHS普遍发生于笼养高产蛋鸡，产蛋率越高越易发生，造成的危害也越大。FLHS的发病情况与许多因素有关，该病发病率、产蛋下降率和死亡率因鸡的品种(系)、日粮组成、应激、环境因素、中毒等因素不同而出现很大的差异，同时还影响整个鸡群正常产蛋高峰期的出现。目前该病已成为许多国家养禽业的常见病。近十几年来，我国养鸡业发展迅猛，集约化养鸡规模不断扩大，该病有逐年增多的趋势，造成巨大的经济损失。迄今，国内外对FLHS的研究颇多，但对于该病形成过程中机体机能的变化、发病机理的研究还比较少，特别是载脂蛋白A及其亚类与FLHS的关系在国内还未见报道。鉴于此，本实验进行了以下研究。 120羽14周龄体重1.4～1.5kg的艾维因蛋鸡，随机分成四组，每组30羽。Ⅰ组为对照组喂基础日粮(11.51MJ/kg/16.1％)，Ⅱ组为菜籽饼中毒组(菜子饼占8％)，Ⅲ组为高能低蛋白组(12.63MJ/kg/14.6％)，Ⅳ组为高能高蛋白组(12.92MJ/kg/17.4％)。各组实验鸡共历时103天。在实验期间，每十天进行生产性能和临床生化指标的检测，每组随机取两羽宰杀，称肝重、腹脂重等，同时取肝、肾做病理学切片观察以确定FLHS的发生。实验结果表明，三个试验组均先后成功地诱发了FLHS。病鸡表现精神萎顿、鸡冠苍白、贫血、产蛋量下降等症状。生化方面，试验组鸡血清钙、血清无机磷含量升高，与对照组比较有差异极显著(P＜0.01)；白蛋白含量降低，A/G比例下降；Ⅱ组血糖降低，Ⅲ、Ⅳ皿糖升高，与对照组比较有极显著差异(P＜0.01)。病理组织学观察表明，Ⅲ、Ⅳ组以脂肪变性为主，肝细胞浆内充满脂肪，严重时肝腺泡结构解体呈分散状态，同时见有一定程度的出血，其中以Ⅲ组较严重，Ⅳ组次之。Ⅱ组则以肝出血为主，并伴有肝细胞的脂肪变性。发生FLHS的鸡通过调整日粮饲喂20天后，其产蛋性能逐渐恢复，血常规、某些生化指标均得到改善，有的接近或恢复到正常水平，进一步证明了上述指标的变化确系FLHS所引起。 血清脂类变化表明，三个试验组患鸡血清总胆固醇正常或升高，胆固醇酯/总胆固醇比例降低(小于60％)，与对照组比较差异极显著(P＜0.01)；甘油三酯(TG)变化无规律，但有升高趋势；高密度脂蛋白胆固醇(HDL-Ch)含量降低，低密度脂蛋白胆固醇(LDL-Ch)含量升高，且HDL-Ch/LDL-Ch比例下降。血清肝酶活性研究发现：病鸡血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、谷氨酰转肽酶-γ(γ-GT)、鸟氨酸氨基甲酰转移酶(OCT)均有不同程度的升高，但ALT不敏感。在Ⅲ、Ⅳ组中ALP、γ-GT较敏感，且呈平行关系。OCT在Ⅱ组中反应敏感，是肝脏病理损害检测的良好指标。以上指标变化均可用于FLHS早期诊断。调整日粮饲喂后，除ALP、γ-GT在Ⅲ、Ⅳ组未能得到很好的恢复外，其它指标均恢复或接近正常水平。 再次通过动物实验，从自由基角度对FLHS发病机制进行了探讨。选用140日龄健康海兰褐壳蛋鸡102羽，随机分为两组(每组设3个重复，每个重复17羽)，饲喂不同日粮(代谢能与粗蛋白对照组分别为11.51MJ/kg、15.58％，试验组分别为14.47MJ/kg、12.55％)进行人工造病实验，进行了生产性能、腹脂、肝脂率等测定和肝脏、肾脏等组织器官的肉眼和组织学变化观察以确证该病的发生。同时测定了血清和肝匀浆中的游离脂肪酸(NEFA)、丙二醛(MDA)含量和脂肪酶(LPS)、脂蛋白脂酶(LPL)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)等生化指标。得出以下结果：(1)实验蛋鸡表现为生产性能下降，肝脂蓄积，血清TG和LDL-Ch升高，HDL-Ch下降，并出现典型FLHS病变，再次证明采用高能低蛋白日粮可以成功复制蛋鸡FLHS。(2)试验组血清和肝脏匀浆中LPS、LPL活力升高。(3)试验组血清和肝脏匀浆中NEFA和MDA含量升高，抗氧化酶：SOD、GSH-Px、CAT活力降低，表明机体抗氧化能力下降。证明自由基在FLHS的发生、发展过程中起重要作用。 在国内首次对与蛋鸡脂类代谢有关的载脂蛋白AⅠ(apoAⅠ)和载脂蛋白AⅡ(apoAⅡ)进行了分离纯化和抗血清的制备。通过磷钨酸沉淀制备蛋鸡血清HDL，用乙醇/丙酮(1:1v/v)脱脂后，经SephadexG-150凝胶层析柱反复层析或DEAESepharoseCL-6B离子交换层析从鸡血清中分离纯化apoAⅠ和apoAⅡ，在Urea-SDS-PAGE电泳中均呈现单一条带。分子量测定apoAⅠ为27,788u，apoAⅡ为8,673u。为了得到特异性高免血清，采用弗氏佐剂充分乳化上述蛋白分别对新西兰雄兔进行多次多点皮内或皮下注射，制备兔抗鸡apoAⅠ和apoAⅡ血清，并自行制备标准血清(apoAⅠ：3.425mg/ml；apoAⅡ：1.112mg/m1)。此外，建立了单向免疫扩散、免疫透射比浊和火箭免疫电泳法三种测定鸡血清apoAⅠ和apoAⅡ方法，并进行方法的比较和筛选。三种方法都能较准确的对apoAⅠ、apoAⅡ浓度进行测定。选用单向免疫扩散法对高能低蛋白饲料诱发的FLHS蛋鸡血清中apoAⅠ、apoAⅡ的含量测定结果表明，随着病情的发展，血清中apoAⅠ、apoAⅡ的含量逐渐下降。 采用第二次动物实验的蛋鸡，第55天随机选取试验组和对照组鸡(高能低蛋白组)各6羽，取肝脏组织备用。在成功扩增apoAⅠ、β-actin的基础上，应用半定量RT-PCR方法检测试验组和对照组肝脏组织中apoAⅡmRNA的表达情况(以β-actin作为内参照予以矫正)。结果表明，1％琼脂糖凝胶电泳显示扩增出的目的条带为204bp和344bp的基因片断，测序报告所得的结果和参照基因的同源性分别达到98％和100％，说明PCR成功扩增出了目的片断。半定量RT-PCR表明试验组肝脏中apoAⅠmRNA对β-actinmRNA的相对丰度均显著低于对照组，说明高能低蛋白饲料可降低鸡肝脏apoAⅠmRNA的表达。 根据上述实验结果，本文还对蛋鸡FLHS发病机理进行了推理和探讨。