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松乳菇(Lactarius deliciosus Gray)属于担子菌亚门(Basidiomycotina)、层菌纲(Hymenomycetes)、伞菌目(Agaricales)、红菇科(Russulaceae)、乳菇属(Lactarius)。它的俗名有很多,如美味松乳菇、松菌、乌松菌、奶浆菌等。松乳菇形态特征明显,容易识别,正常情况下呈橘黄色,局部偏乳白或乳黄色。松乳菇分布也十分广泛,在我国则主要分布在长江中下游地区及局部沿海地区,根据有关记载,湖南、四川、云南以及贵州是松乳菇最主要的几个生产地。目前关于松乳菇的研究主要集中在人工驯化栽培和遗传多样性研究,而关于松乳菇多糖的分离提取纯化、成分分析以及生物活性的研究报道却极少,且有报道的不同地区的松乳菇提取得到的多糖成分都有很大差别。因此,本课题组实地采集马尔康松乳菇,拟采用热水浸提法提取马尔康松乳菇的粗多糖,再使用DEAE-52纤维素离子交换柱对提取的粗多糖进一步纯化,然后借助光学色谱技术对马尔康松乳菇多糖的结构进行分析鉴定,最后再借助各种免疫学实验研究其生物活性,为马尔康松乳菇的进一步研究与开发奠定基础。本文分三个部分,分别是松乳菇多糖的提取与分离纯化、松乳菇多糖的结构解析以及松乳菇多糖的免疫调节活性研究,分别包含如下内容:1松乳菇多糖的提取、分离与纯化本章获得松乳菇粗多糖的方法是热水浸提法;Sevage法去蛋白;DEAE-52纤维素离子交换柱纯化得松乳菇纯多糖;通过正交试验探讨三种影响因素对松乳菇多糖的提纯效果的影响,其最佳工艺选择180 g的柱填料、0.5 g的上样量和0.01 mol/L的洗脱浓度可获得最大的出糖量,得糖率为12%。2松乳菇多糖的结构解析通过高效凝胶渗透色谱检测马尔康松乳菇多糖重均分子量为573689 Da;通过红外色谱、核磁共振色谱分析均显示被检测物具有明显的多糖的特征基团;通过高效液相色谱分析多糖成分主要由果糖与半乳糖以比例约2:3组成。3松乳菇多糖的免疫调节活性研究通过小鼠单核巨噬RAW264.7细胞增殖实验、中性红吞噬实验、体外杀瘤实验、TNF-α和IL-6 ELISA实验、B细胞增殖和B细胞周期实验探讨其生物活性。结果显示:LDG-M(马尔康松乳菇多糖)能够显著提高小鼠单核巨噬RAW264.7细胞的增殖效率,当LDG-M浓度为5μg/ml时,可提高87.8%;对中性红的吞噬活性有显著的促进作用,当LDG-M浓度为2.5μg/ml时,可提高其61.4%的吞噬效率;当LDG-M浓度为5μg/ml时,对小鼠成纤维细胞L929细胞的杀伤活性可提高49.8%;当LDG-M浓度为2.5μg/ml时,TNF-α可增加13.4倍的分泌量;当LDG-M浓度为5μg/ml时,IL-6的分泌量也增加了23.5倍;LDG-M能极显著地促进B淋巴细胞进入细胞周期以及促进其增殖,当LDG-M浓度为2.5μg/ml时,B淋巴细胞的增殖速度提高39.9%。通过以上研究,我们初步获得了马尔康松乳菇多糖的提取条件,鉴定出该多糖是由果糖与半乳糖约以2:3的比例构成的一种结构新颖的多糖,并且该多糖具有较好的体外免疫活性。本研究为马尔康松乳菇的开发利用提供了一定的理论基础和科学依据。