【摘 要】
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该研究应用PCR技术扩增了CRT N区编码122-180位氨基酸的DNA片段(N58),克隆至大肠杆菌表达载体pET-3c中,获得含N58基因的重组质粒pET-N58,转化大肠杆菌BL21(DE3),构建了能表达
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该研究应用PCR技术扩增了CRT N区编码122-180位氨基酸的DNA片段(N58),克隆至大肠杆菌表达载体pET-3c中,获得含N58基因的重组质粒pET-N58,转化大肠杆菌BL21(DE3),构建了能表达N58蛋白的大肠杆菌工程菌BL21(DE3,pET-N58).SDS-PAGE结果显示,在IPTG诱导下,N58基因在BL21(DE3,pET-N58).SDS-PAGE结果显示,在IPTG诱导下,N58基因在BL21(DE3,pET-N58)中获得表达,表达产物以包涵体形式存在.光密度扫描分析估算,表达产物约占菌体总蛋白的35.4﹪.包涵体经洗涤、溶解、复性和Sephadex G75分子筛过滤支析纯化,纯度达91.5﹪.用MTT法、CAM血管生成法和抑瘤试验测试了表达产物对内皮细胞增殖,血管生成和肿瘤生长的抑制作用,结果证明表达的N58蛋白能抑制人脐静脉内皮细胞的增殖和CAM血管的生成,并对小鼠黑色素瘤的生长有明显的抑制作用,为寻找高效和分子量小的新的血管生成抑制因子和抗癌蛋白打下良好基础.
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