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目的 先天性肛门直肠畸形（Congenitalanorectalmalformations，ARMs）是小儿外科常见的消化系统畸形，发病率在世界范围内占出生婴儿的1/5000-1/1500，在中国高达1/3500。肛门直肠畸形患儿不仅肛门直肠本身发育缺陷，还常伴有泌尿系统以及其他系统的畸形，严重畸形患儿难以存活，手术治疗后近1/3的患儿合并不同程度的排便功能障碍等而影响生活质量，给社会和家庭带来了沉重的负担。 膜联蛋白A4(Annexin-4，ANXA4)是一类Ca2+依赖的磷脂结合蛋白质，具有参与囊胞运输、促进胞膜融合、细胞骨架运动、钙离子通道形成、磷脂化与膜受体的功能调节等功能，参与细胞的生长、分化及转化。在人体许多器官组织如肾、肺、气管和胃肠道等组织大量表达。并且有研究证实其先天性肛门直肠畸形和先天性脊柱裂胎鼠脊髓中表达下调。但是目前尚无有关ANXA4在肛门直肠畸形胎鼠末端直肠表达、分布情况的报道。本研究的目的在于观察ANXA4在妊娠第16天(E16)和妊娠第19天(E19)的正常和ARMs胎鼠末端直肠的表达，以探讨他们与ARMs发生的关系。 实验材料 一、实验动物 体重250克-300克Wister大白鼠，由中国医科大学附属盛京医院动物部提供。 二、实验试剂 1.一抗试剂ANXA4多克隆抗体:兔抗鼠，北京博奥森生物技术有限公司。 2.免疫组化试剂盒:北京中杉金桥生物技术有限公司。 3.DAB显色剂:北京中杉金桥生物技术有限公司。 4.乙烯硫脲(ETU):购自Sigma-Aldrich德国公司。 三、实验方法 在成熟健康Wister孕鼠妊娠第10天(E10)，按125mg/kg经胃管灌入乙烯硫脲ETU（浓度为1％），制作ARMs大鼠动物模型;正常组给予等量的生理盐水，分别在大鼠妊娠第16天(E16)和妊娠第19天(E19)时剖宫取胎，经4％多聚甲醛磷酸盐缓冲液固定、脱水后制成蜡块，行矢状面的连续切片，行ANXA4的免疫组化染色。所有切片均用NIS-ElementsF3.0系统NikonE800采集图片。用Image-proPlus6.0图像处理软件进行平均光密度值分析。 结果 在正常组，E16胎鼠的末端直肠中，肠壁各层次逐渐发育，可见阳性细胞群主要位于粘膜层，肌层也有表达;E19时，肠壁各层发育逐渐完善，在粘膜层及肌层中可见大量阳性细胞，粘膜下层也可见少量阳性细胞。ANXA4的阳性表达为棕黄色颗粒，主要位于细胞浆中，在正常组肠壁中均有表达，E16的平均光密度值为0.0895±0.0085，E19的平均光密度值为0.1286±0.0133，两者存在统计学差异，提示随着肠道发育的成熟，ANXA4的表达也逐渐增强。在ARMs组，E16时，可以观察到所有标本短尾或无尾，尾端结构较紊乱，于粘膜层可见少量阳性细胞表达;E19时，肠壁各层分化不良，盲端已经见不到正常肠壁结构，阳性细胞分布减少，在粘膜层及粘膜下层呈弱阳性反应。经平均光密度值分析，与正常组相比有统计学差异。 结论 本研究证实ANXA4在正常胎鼠末端直肠的粘膜层及肌层中有表达，并随着肠道发育的成熟，表达逐渐增强，在ARMs组胎鼠末端直肠中低表达或不表达。