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目的 表达于细胞膜和部分细胞器的一种重要的胆固醇流出调节蛋白—ABC1蛋白的发现(ATP Binding Cassette Transporter 1)，使胆固醇逆向转运成为近年研究的热点，ABC1蛋白的主要功能是将细胞内的胆固醇转运至细胞外与HDL结合，从而降低细胞内的胆固醇负荷，这对于维持机体特别是血管壁组织的胆固醇平衡，调节血浆脂质代谢和防止动脉粥样硬化的发生均具有重要意义。核受体参与对机体多种生理和病理过程的调节，已知部分核受体与动脉粥样硬化的形成以及胆固醇转运和脂质代谢密切相关。本课题以THP-1细胞为研究对象，探讨ABC1蛋白在胆固醇逆向转运中的作用以及核受体PPARγ、LXRα、RXRα对ABC1蛋白表达和胆固醇逆向转运的影响；同时观察脂蛋白和氧化型脂蛋白对THP-1细胞ABC1mRNA表达的影响，核受体PPARγ、LXRα、RXRα对THP-1细胞ABC1mRNA的调控机制，核受体PPARγ、LXRα、RXRα对THP-1细胞ABC1和CD36mRNA表达影响的差异及意义；核受体PPARγ、LXRα、RXRα活化及ABC1介导的胆固醇逆向转运对oxLDL引起的THP-1细胞炎症因子分泌的影响；此外，为了全面了解核受体PPARγ、LXRα、RXRα在胆固醇逆向转运和胆固醇代谢中的作用，我们以HepG2肝细胞为研究对象，探讨了核受体PPARγ、LXRα、RXRα对胆固醇代谢过程中的限速酶-胆固醇7α羟化酶(CYP7A1)表达的影响，为药物调节胆固醇逆向转运和胆固醇代谢提供理论依据。方法 1.一次性密度梯度超速离心法分离人血清脂蛋白，获得LDL、HDL、VLDL，<WP=9>并用Cu++氧化法氧化LDL、HDL获得oxLDL、oxHDL；2.THP-1细胞培养；3.用oxLDL80mg/L与THP-1细胞共同孵育建立泡沫细胞模型；4.western blot法检测核受体PPARγ、LXRα、RXRα的相应配体曲格列酮、22(R)-HC、9-CRA对THP-1单核巨噬细胞ABC1蛋白表达的影响；5.通过测定细胞内胆固醇含量观察ABC1介导胆固醇逆向转运的作用，以及核受体PPARγ、LXRα、RXRα的相应配体对ABC1介导胆固醇逆向转运的影响；6.用一步法逆转录聚合酶链反应检测小剂量和大剂量LDL、HDL、oxLDL、oxHDL对THP-1细胞源性单核巨噬细胞ABC1mRNA表达的影响；7. 用一步法逆转录聚合酶链反应检测核受体PPARγ、LXRα、RXRα的相应配体对PPARγ、LXRα、RXRα、ABC1mRNA表达的影响，以探讨核受体PPARγ、LXRα、RXRα对ABC1表达的调控机制；8. 用一步法逆转录聚合酶链反应检测核受体PPARγ、LXRα、RXRα的相应配体对THP-1细胞源性单核巨噬细胞ABC1和CD36mRNA表达影响的差异；9. ELISA法检测核受体PPARγ、LXRα、RXRα的相应配体及ABC1介导的胆固醇逆向转运对THP-1细胞TNFα、IL-6分泌的影响；10. HepG2肝细胞培养；11. 用一步法逆转录聚合酶链反应检测核受体PPARγ、LXRα、RXRα的相应配体曲格列酮、22(R)-HC、9-CRA对HepG2肝细胞CYP7A1mRNA表达的影响；12.原位杂交法检测曲格列酮、22(R)-HC、9-CRA对HepG2肝细胞原癌基因c-myc表达的影响，以探讨相应核受体活化对CYP7A1mRNA表达的影响与原癌基因c-myc表达水平的关系。结果 1.核受体PPARγ、LXRα、RXRα的相应配体曲格列酮、22(R)-HC、9-CRA可刺激THP-1细胞源性巨噬细胞ABC1蛋白表达增加，三者两两联合运用似具协同作用；2. 曲格列酮、22(R)-HC、9-CRA可以增加ABC1蛋白介导的泡沫细胞内胆固醇向培养基中ApoA-I的逆向转运，用ABC1的单克隆抗体预处理泡沫细胞，可以阻断胆固醇的逆向转运，提示ABC1的确是介导细胞内胆固醇逆向转运的重要蛋白；3.小剂量(20mg/L)的LDL、oxLDL、HDL、oxHDL作用于THP-1细胞源性的单核巨噬细胞24小时，可致ABC1mRNA的表达轻度增高，其中以oxLDL、oxHDL为明显，而大剂量(120mg/L)的LDL、oxLDL、oxHDL对ABC1mRNA的表达却具有抑制作用， 大剂量HDL未显示抑制作用；4. 与对照组相比较，THP-1细胞经曲格列酮，22(R)-HC、9-CRA24作用小时，曲格列酮组、22(R)-HC组、9-CRA组、TROG＋22(R)-HC组、<WP=10>TROG＋9-CRA组、22(R)-HC＋9-CRA组ABC1 mRNA的表达明显增强。即核受体PPARγ、LXRα、RXRα的活化可导致THP-1单核巨噬细胞ABC1 mRNA的表达明显增强，联合作用组(即核受体PPARγ、LXRα、RXRα两两活化)ABC1 mRNA增强似更为明显；曲格列酮组PPARγmRNA表达有增强，而22(R)-HC组和9-CRA组并PPARγmRNA无明显增强，提示PPARγ基因并非LXRα、RXRα作用的靶基因；曲格列酮作用组LXRαmRNA表达有显著增强，22(R)-HC组LXRαmRNA的表达亦明显增强，9-CRA组则无明显变化；曲格列酮组、22(R)-HC组、9-CRA组RXRαmRNA均无明显增强，即核受体PPARγ、LXRα、RXRα活化对THP-1细胞RXRαmRNA表达无明显影响；5.与对照组比较曲格列酮、22(R)-HC、9-CRA作用于THP-1细胞源性的单核巨噬细胞24小时，曲格列酮组CD36 mRNA表达增高，明显强于对照组，而22(R)-HC组CD36 mRNA表达无明显增高，9-CRA组CD36 mRNA表达明显降低，即核受体PPARγ、LXRα、RXRα活化后对THP-1细胞ABC1和CD36 mRNA表达的影响存在差异；6.oxLDL能刺激THP-1细胞TNFα、IL-6分泌增加，核受体PPARγ、LXRα、RXRα活化及ABC1介导的胆固醇逆向转运可使oxLDL刺激的THP-1细胞TNFα、IL-6分泌降低；7. 曲格列酮、22(R)-HC