【摘 要】
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以合浦珠母贝(PinctadaFucata)的外套膜和内脏团为提酶材料,经Tris-HCI缓冲液(pH8.9)抽提,正丁醇处理,硫酸铵分级分离获得粗酶制剂,进一步经过SephadexG-150凝胶过滤柱层析,D
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以合浦珠母贝(PinctadaFucata)的外套膜和内脏团为提酶材料,经Tris-HCI缓冲液(pH8.9)抽提,正丁醇处理,硫酸铵分级分离获得粗酶制剂,进一步经过SephadexG-150凝胶过滤柱层析,DEAE-32离子交换柱层析等纯化,获得电泳和层析单一纯的碱性磷酸酶制剂,比活力达8723unit/mg.测定酶的分子量为85.5kD,是由两个分子量为43kD的相同的亚基组成.该酶对底物pNPP的水解反应的最适温度是45℃,最适pH为9.72,活化能为20.14kJ·mol<1>,初速度为6.1μmol·L<-1>·min<-1>.米氏常数K<,m>为2.86mmpl/L,最大反应速度V<,m>为9.09μmol/(L·min).研究盐酸胍对酶的失活动力学,发现经过盐酸胍预处理24h的酶是不可逆失活,整个动力学模型呈不可逆的竞争性抑制.研究插核对合浦珠母贝外套膜上碱性磷酸酶比活力的影响,结果表明,开始由于创伤,该酶比活力下降,而后开始提高,可见在珍珠质形成和分泌的过程中,该酶的比活力会有明显提高.关于一些药剂对外套膜小片上碱性磷酸酶活力的影响的试验结果表明,PVP、ATP、促珠泌素混合试剂能较有效提高酶活力,这对人工育珠的产量和质量有一定的影响.
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