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三七为五加科(araliaceae)人参属植物[Panax notoginseng(Burk.)F.H.Chen]的干燥根。现代研究已表明,三七中含有皂苷,三七素,多糖,氨基酸,类黄酮,植物固醇,脂肪酸,挥发油,脂族烃,乙炔和微量元素。三七与其同属的人参成分极其相似,能够在机体的不同部位发挥药效,因而也被誉为“适应原样”药物。三七总皂苷(total saponins of Panax notoginseng,PNS)包括四环三萜类达玛烷型皂苷(PPD型和PPT型),不含齐墩果酸型皂苷,其中PPD型人参皂苷在C-3和/或C-20位置有糖基,而PPT型人参皂苷C-3位置有羟基,在C-6和/或C-20位置有糖基。三七总皂苷中PPD型皂苷包括人参皂苷Rb1、Rd等,PPT型皂苷如R1、Re、Rg1等,其中Rb1、Rg1含量较高。现代药理学研究表明三七具有活血散瘀、止血、抗衰老、抗疲劳、调节血糖平衡、消炎镇痛、抗肿瘤、改善心脑器官血液供应等生物活性。三七提取物口服给药后,PNS在胃酸中易被破坏降解而形成脱糖基产物,在肠道中,也能够由肠道微生物所表达的糖苷酶降解,形成次级代谢物或苷元,通过多种方式吸收进入机体系统,进而显示出疗效。主要通过苷元、糖基的种类、数目及糖苷键的位置来区分不同的三七皂苷。已有研究证实,影响中药皂苷类成分吸收进而发挥药理活性的关键环节是皂苷类成分在胃肠道的脱糖基代谢,经过中药皂苷类成分脱糖基代谢的途径很多,除了目前炙手可热的肠道菌群介导的脱糖基代谢,也可以通过胃液酸水解的方式生成众多的脱糖基代谢产物。本课题试图识别三七中的抗凝活性成分,以人工胃液介导的三七总皂苷脱糖基代谢为出发点,辨识出三七总皂苷抗凝活性成分群,在此基础上通过三七总皂苷抗凝活性成分以及三七中其他成分对其抗凝活性成分体内药动-药效关联性研究来确认三七总皂苷抗凝活性成分群。本课题建立了 HPLC同时测定三七总皂苷及其脱糖基代谢产物的方法。通过调节人工胃液温孵三七总皂苷的条件(于1 1个不同时间点取样),调控三七总皂苷脱糖基的程度,进而生成种类和数目不同的脱糖基代谢产物,从而建立了三七总皂苷体外脱糖基代谢的HPLC-UV图谱。这些不同样品的抗凝活性测定采用APTT法。运用SPSS软件(SPSS 16.0 for windows,SPSS Inc.,USA)中的多元线性回归模型分析11个温孵样品的22个成分的峰面积值与APTT活性之间的谱效相关性,进一步找出可能的抗凝效应成分群为:人参皂苷RR1、Rb1、Rg2和Rg3。本课题同时探索了三七中其他成分能否影响抗凝活性成分群的抗凝活性,采用血小板聚集抑制率和凝血酶四项测定两个实验方法评价抗凝活性。实验结果表明,三七全粉组的血小板聚集抑制率(%)74.59±2.26,三七多糖配伍三七总皂苷组的血小板聚集抑制率(%)59.45±1.64,三七总皂苷组的血小板聚集抑制率(%)40.41±4.50,阳性药组的血小板聚集抑制率(%)75.39±1.62,三七全粉组、三七多糖配伍三七总皂苷组、三七总皂苷组,三组的血小板聚集抑制率两两之间存在显著性差异。凝血酶四项实验结果显示,三七全粉组、三七多糖配伍三七总皂苷组与三七总皂苷相比,三七全粉组、三七多糖配伍三七总皂苷组能显著延长血浆中的APTT(p<0.05)和PT(p<0.001)值,三七全粉组与三七多糖配伍三七总皂苷组相比,三七全粉组能显著延长血浆中的PT跟TT值(p<0.05)。上述试验结果表明,抗凝活性由强至弱的顺序为.:三七全粉组>三七多糖配伍三七总皂苷组>三七总皂苷组。提示三七中的其他成分对皂苷类成分的抗凝活性有一定促进作用,此外,三七中除多糖、皂苷之外的其他成分亦具有一定的抗凝活性。基于第一章所筛选出的抗凝活性成分群,我们推测三七中的其他成分能够对抗凝活性成分群的活性发挥产生显著影响。本课题从药代动力学的角度进一步探究三七中其他成分对抗凝活性成分群的影响。本论文对三七口服给药进行多剂量研究,药代动力学研究结果显示,三七全粉组、三七多糖配伍三七总皂苷组、三七总皂苷组,不同组别的各抗凝活性成分,AUC(0-∞)在一定程度上存在着显著性差异(p<0.05)。三七全粉组和三七总皂苷配伍多糖组的Rg2、Rg1与三七总皂苷组相比,Cmax有显著性差异。三七全粉组的Rg2、Rg1与三七总皂苷配伍多糖组相比,Cmax有显著性差异。三七总皂苷配伍多糖组和三七总皂苷组的Rg2、Rg1与三七全粉组相比,AUC0-t有显著性差异。在多剂量研究中,从第1天到第8天,人参皂苷Rb1、Rg1的AUC(0-24h)增加,第8天的值相比于第1天分别增加了4.76倍和5.23倍,Cmax分别增加3.86倍和8.86倍。由药代动力学实验结果推测三七中其他成分对抗凝活性成分群的活性发挥产生显著影响的环节可能是:三七中的其他成分增加了抗凝活性成分群的体内暴露水平。通过药动药效关联研究,探讨三七中其他成分对抗凝活性成分群的药理活性的影响,是否与这些成分影响了抗凝活性成分群的体内药动学行为有关。体内药动药效关联性研究结果表明,人参皂苷Rg2、Rg3、Rg1、Rb1的r分别为0.827、0.674、0.469、0.299,人参皂苷Rg2、Rg3与抗凝活性的相关性较好(p<0.05),而人参皂苷Rg1、Rb1与抗凝活性的相关性差(p>0.05),这与第一章体外筛选的抗凝活性成分群有所差别,本章仅是考虑单个成分与抗凝活性的相关性,中药是一个复杂的系统,没有考虑成分之间的协同、叠加以及拮抗作用。综上,本课题通过揭示三七中皂苷类的抗凝活性成分群,从而进一步探索出三七中的其他成分能够对抗凝活性成分群的活性发挥产生显著影响,并从药代动力学角度阐明其影响环节可能是:三七中的其他成分增加了抗凝活性成分群的体内暴露水平,进一步将药动药效关联起来进行研究,从而以体内的视角进一步验证所筛选的抗凝活性成分群,为后续实验研究方向提供了很好的研究基础。