山羊骨桥蛋白基因(OPN)多态性及其与胎盘效率、繁殖性能的相关性研究

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山羊繁殖性能是山羊重要育种指标。提高山羊的窝产羔数对于保障养羊业持续健康发展、提高养羊业的经济效益和农牧民养殖积极性都具有重要意义。由于山羊产羔数具有遗传力低(h2=0.1~0.15)和负的母体效应等特点,多年来通过表型选择直接提高母羊的窝产羔数的途径没有获得较大的遗传研究进展。胎盘效率(placental efficiency, PE)即出生窝重与胎盘重之比,是1999年Wilson等人在对猪产仔数的选育研究中提出的概念,一些在猪、绵羊上的研究结果表明,窝产仔数与PE呈正相关。在分子水平上,骨桥蛋白(osteopontin, OPN)是子宫—胎盘微环境的重要组成部分,该分子几乎参加了生殖的全过程,包括受精、胚泡着床及胎盘形成等,OPN基因是影响胎盘性状、繁殖性能的一个重要候选基因。然而,OPN基因能否作为山羊繁殖性状辅助选择的分子标记,其与胎盘效率、繁殖性能的相关性如何,在山羊上尚未有明确的报道。本研究借鉴其它畜种的研究成果,探索山羊OPN基因遗传多样性及其与胎盘效率、繁殖性能相关性,为建立稳定有效的山羊繁殖力选育方法提供理论依据,促进山羊高繁新品系的选育。本研究分两部分。第一部分,山羊胎盘效率、胎盘性状测定及其与繁殖性能之间的相关性研究。具体方法:(1)繁殖性能测定。选取乐至黑山羊健康分娩母羊30只,测定其胎次、窝产羔数和窝产重。(2)胎盘效率、胎盘性状测定。收集分娩后胎盘,测定胎盘重量、子叶数量和子叶重量。(3)相关性比较。比较不同个体间的胎盘性状指标和繁殖性能指标之间的关系。第二部分,OPN基因多态性及其与胎盘效率、繁殖性能之间的相关性研究。具体方法:(1)利用PCR-SSCP技术分析乐至黑山羊母羊共计70个样本的OPN基因启动子、外显子6、外显子7的单核苷酸多态性(single-nucleotide polymorphism, SPN)。(2)相应母羊的SNPs与胎盘效率、窝产羔数等进行关联和相关性分析,探索优势基因。主要研究结果如下:1.乐至黑山羊平均初生窝重为4682.40±3022.91 g(n=30),平均胎盘效率为10.454-3.51(n=30);不同个体间的胎盘效率差异极显著(P<0.01);在窝产羔数方面,高胎盘效率组显著高于低胎盘效率组(2.56±0.44 vs 1.30±0.15,P<0.05);经产组母羊的窝产羔数、羔羊平均重、胎盘重、子叶重和子叶均重分别为2.53±0.30,2636.27士119.57 g,622.33±57.64 g,262.80±30.38 g和2.35±0.21 g,初产组分别为1.334±0.48,2261.60±106.85 g,288.87±32.35 g,140.53士18.11 g和1.14±0.09 g,对应指标相比较,差异显著或极显著(P<0.05或P<0.01);不同产羔类型对胎盘性状影响显著,随着羔数的增加,胎盘重、子叶重和子叶均重显著性增高(P<0.05),子叶密度显著性减少(P<0.05):窝产羔数与胎盘效率、胎盘重、子叶重和子叶均重之间呈显著正相关(r=0.439:r=0.845;r=0.831;r=0.603,P<0.05或P<0.01),与子叶密度呈显著负相关(r=-0.539,P<0.05);胎盘效率与子叶重、子叶均重之间呈显著正相关,与子叶密度呈显著负相关;子叶均重与子叶密度呈显著负相关。2.乐至黑山羊OPN基因启动子、第6外显子和第7外显子均出现AA、AB两种基因型。其多态信息含量(polymorphism information content, PIC)分别为0.365、0.064和0.360。χ2适合性检验表明:乐至黑山羊在OPN基因第6外显子位点维持了Hardy-Weinberg平衡(P>0.05),在OPN基因启动子和第7外显子位点均偏离了Hardy-Weinberg平衡(P<0.01)。对OPN基因三个位点的多态性与对应母羊的胎盘效率、繁殖性能分别做相关性分析,结果表明OPN基因启动子基因型AA、AB在胎盘效率上无显著性差异(P>0.05),在窝产羔数上AA基因型有高于AB基因型的趋势,且差异显著(P<0.05);第6外显子区基因型AA、AB对母羊的胎盘效率和繁殖性能影响均不显著(P>0.05);第7外显子区AA基因型的胎盘重、子叶重和子叶均重均显著性高于AB基因型(P<0.01或P<0.05),其窝产羔数比AB基因型多1.97只(P<0.01)。综上所述,得到以下结论:1.山羊的胎盘效率与窝产羔数呈显著性正相关。2.OPN基因第7外显子与胎盘效率关联,并可能作为山羊高繁选育候选基因片段。
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