MSCs分泌的微泡通过转移线粒体促进PMVECs修复的研究

来源 :电子科技大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yatou5004
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
研究目的:研究间充质干细胞(MSCs)分泌的微泡(MVs)通过转移线粒体对受损肺微血管内皮细胞(PMVECs)的修复作用。研究方法:(1)为筛选出浓聚线粒体的最佳培养条件,将MSCs置于常氧(21%O2)及低氧(1%O2)条件下分别培养24、48、72h后提取上清,使用差速离心法将上清中的微泡分离提取出来,电镜下观察MVs的形态及大小,流式分析MV表面标志物,二喹啉甲酸(BCA)蛋白定量法测定MVs的蛋白浓度,JC-1判断细胞凋亡,Western blot检测线粒体相关蛋白(CYP1A1、CYP1A2)的表达。(2)为观察MVs中线粒体向PMVECs中转移,分别用荧光染料染MSC-MVs和PMVECs的线粒体,在共聚焦荧光显微镜下观察线粒体的转移情况;将MSCs、MVs与脂多糖(LPS)诱导损伤的PMVECs共培养,分为EC组、EC+LPS组、EC+LPS+MSC组、EC+LPS+MV组,Western blot检测共培养后内皮细胞中线粒体相关蛋白的变化。(3)为评估线粒体对受损内皮细胞的修复作用,我们使用罗丹明-6G(rho)抑制线粒体呼吸链,用JC-1及ROS试剂盒评估线粒体功能是否被抑制。然后将MSCs、MVs、MVs-rho与脂多糖(LPS)诱导损伤的PMVECs共培养,分为EC组、EC+LPS组、EC+LPS+MSC组、EC+LPS+MV组和EC+LPS+MV-rho组,Western blot检测内皮细胞合成(iNOS、eNOS)及连接蛋白(VE-cadherin)的表达,FITC-葡聚糖法检测内皮细胞的通透性,流式检测内皮细胞的早期和晚期凋亡率,JC-1试剂盒检测线粒体膜电位,ELISA检测炎症因子(IL-6、IL-10)水平,ROS试剂盒评估活性氧簇的变化。研究结果:(1)电镜观察常氧及低氧均能分离出直径为1001000nm之间的圆形/卵圆形膜性结构的MVs;流式检测MVs表面标志物CD44和CD29均呈阳性表达,表达率分别为97.6%和95.9%,CD34为阴性表达;24h常氧培养为分离MVs、线粒体浓度的最佳培养条件。(2)共聚焦显微镜下直视看到MSC-MVs中的线粒体能够向PMVECs转移;Western blot结果显示MSC及MV组均能显著增加PMVECs中CYP1A1和CYP1A2的蛋白表达。(3)使用罗丹明-6G后,线粒体膜电位及ROS显著降低;与LPS损伤组相比,MSC、MV共培养组可以显著改善内皮细胞合成(iNOS、eNOS),增加抗炎细胞因子(IL-10)的水平,降低内皮细胞通透性,降低早期凋亡率以及活性氧水平,内皮细胞间连接蛋白(VE-cadherin)的表达较LPS组相比有升高趋势,但差异没有统计学意义;MV-rho组与MSC组、MV组相比,内皮细胞合成蛋白以及抗炎因子的表达显著降低,内皮细胞通透性、早期凋亡率、活性氧的水平显著升高,内皮细胞间连接蛋白的表达较MSC、MV组相比有降低趋势,但差异没有统计学意义。研究结论:MSCs可以通过MVs向PMVECs转移线粒体,并减轻PMVECs的损伤。
其他文献
研究了具有线性恶化工件的单机排序问题,其中线性恶化工件指的是工件的加工时间是开工时间的线性增长函数.在一般情况下,对目标函数为极小化完工时间平方和与极小化总误工数
"德之行"是思孟"五行"学说的基础.通过对"德"义发展史的考查,本文认为"德之行"是子思对早期儒家"德行"观的一个突破,而孟荀思想的差异体现了儒者在"行"和"德之行"这两种"德"
思辨能力是衡量人才综合素养的重要内容之一,在当前素质教育背景下,通过学科培养学生的思辨能力对于英语教学来说是主要的发展目标。目前独立学院的英语专业对于学生思辨能力
中间业务是指银行业在资产业务和负债业务的基础上,不运用或较少运用银行的资产,以中间人或代理人的身份为客户办理代理、委托、担保和信息咨询等并收取服务费的业务。由于中间
经颈静脉肝内门体分流术(TIPS)可以显著降低门静脉压力,减少上消化道出血和腹水产生,对于反复发生的门静脉高压性上消化道出血,经内科多方治疗无效,肝功能失代偿期患者,是一种
智慧医疗是综合运用物联网、互联网、云计算、大数据等技术,实现医疗信息互联、共享协作、临床创新、诊断科学以及公共卫生预防等目标的系统工程。英国在全民免费医疗的体系
中学生科技创新能力的培养关系到国家综合国力的提升,是一个民族能屹立不倒的源动力,本文主要分析了科普教育在激发中学生的创新意识和兴趣、培养科技创新思维和能力,树立正
目前同步电机普遍采用电刷和滑环给励磁绕组供电,这种接触式的传统励磁方式存在线路老化的隐患,而且电刷和滑环的相互摩擦会产生金属废屑,可能会导致机体的电气绝缘性能降低。感应耦合电能传输(inductively coupled power transfer,ICPT)技术因其电能接入安全、可靠、灵活的特点,受到各国外研究学者广泛的关注。将ICPT技术应用到同步发电机励磁环节,利用气隙进行能量传递,可以弥
思想政治课,是培养人的世界观、人生观、价值观最重要的一门学科。一个人的政治思想素质决定着其综合素质的发展方向,同时也是其他素质发展的精神动力。思想政治课贯穿培养学
为探讨生长素对荠菜心皮发育的影响,构建了生长素报告系统DR 5∶∶GFP,通过农杆菌介导法获得了转基因荠菜植株。荧光显微镜观察结果显示,荠菜心皮发育早期上端两侧荧光信号较