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目的：1.构建带有雌激素受体编码区的KLF4真核表达载体,并筛选出对小鼠巨噬细胞系RAW264.7形成稳定转染的细胞株,观察经Tamoxifen诱导的重组载体是否可入胞核内表达。2.观察KLF4基因对小鼠巨噬细胞系Raw264.7细胞向破骨分化及其功能的影响,并对其机制进行初步探讨。3.探讨使用CD11b-Cre小鼠和KLF4loxp小鼠杂交后得到在破骨前体细胞及破骨细胞中特异性敲除KLF4转基因小鼠模型的可行性,了解KLF4敲除后的破骨前体细胞对破骨分化及其功能的影响。方法：1.扩增KLF4全长片段,将改良型小鼠雌激素受体(oestrogen receptor, ER)的激素链接区(hormone binding domain, HBD)(MOR G525R)序列与之融合后插入pCGF5-IEGZ载体中,转染并筛选稳定表达的RAW264.7细胞株,流式细胞仪检测筛选的转染效率,Q-PCR及Western blot检测KLF4的表达；DAPI核染色观察经Tamoxifen诱导后重组载体转运胞核中的表达情况。2. Realtime-PCR及Western blot检测正常RAW264.7细胞成破骨分化各时间点KLF4的表达情况；抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色观察过表达KLF4之细胞破骨分化的形态改变,并检测转染后的细胞分化成破骨细胞的骨吸收功能及破骨细胞功能特异性基因的表达；检测转染组破骨诱导分化后RANK的表达。3.将KLF4内含子1和3序列上分别含有loxp序列的小鼠(即KLF4loxp小鼠),与由CDllb启动子控制表达Cre重组酶(CD11b-cre)的小鼠进行杂交,经过鉴定得到纯合子的目的小鼠(KLF4fl/fl;CD11b-Cre);从目的小鼠中分离KLF4-/-破骨前体细胞,观察其向破骨细胞分化的能力及骨吸收功能。结果：1.电泳鉴定KLF4全长片段及pCGF5IEGZ-KLF4ER重组体双酶切结果符合设定要求,重组质粒构建成功；目的载体成功转入细胞中,转染19d后流式细胞测定稳定株转染效率达95.31%；20d KLF4蛋白及mRNA水平均明显高于空转组(P<0.05)；Tamoxifen可重组载体进入细胞核内表达,且表达的生物效应优于对照组。2.AW264.7细胞经破骨诱导分化后的第1、3、5d时间点KLF4的表达水平无明显变化,但较未分化组为低；KLF4基因稳定转染后明显抑制RANKL介导的破骨细胞形成的过程及骨吸收活性,且破骨细胞特异性功能基因cathepsin K、MMP-9和TRAP表达均下降；KLF4基因转染组经破骨诱导分化后RANK的表达相比单纯诱导组降低。3.雄性CD11b-Cre小鼠与雌性KLF41oxp小鼠杂交,经PCR鉴定先得到F1代KLF4fl/+;CD11b-Cre小鼠；后者与雌性KLF41oxp小鼠杂交,再经鉴定得到目的小鼠(KLF4fl/fl;CD11b-Cre);从目的小鼠胫股骨骨髓中成功提取出破骨前体细胞,经破骨诱导分化,其分化能力及骨吸收功能与正常小鼠原代破骨前体细胞比较,无明显差别。结论：1.该实验为国内首次用pCGF5IEGZ型载体将带有可受调控的雌激素受体编码区的目的基因成功导入通用的小鼠巨噬细胞系中。2.KLF4因子对RAW264.7细胞成破骨分化及细胞功能起抑制作用,该作用可能与抑制RANK的表达相关。3.利用CD11b-Cre小鼠和KLF41oxp小鼠杂交获得实现在破骨前体细胞及破骨细胞中特异性敲除KLF4的转基因小鼠模型具有可行性；KLF4"/"目的小鼠破骨前体细胞对经诱导成破骨分化及细胞功能无影响。