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鳜(Siniperca chuatsi)是我国优质淡水鱼的重要品种,但随着鳜养殖技术问题的解决和养殖规模的逐年扩大和养殖密度的提高,严重的病害问题已成为限制鳜养殖业发展的主要瓶颈。特别是1994年起由传染性脾肾坏死病毒(Infectious spleen and kidney necrosis virus,ISKNV)引起的鳜虹彩病毒病最为严重。因此,对其开展深入研究以及免疫防控研究意义重大。病毒灭活疫苗因具有制备简便、免疫效果稳定、研发周期短等优势而成为最具产业前景的疫苗之一。而有效的免疫佐剂可以提高病毒灭活疫苗的特异性免疫应答,因此对ISKNV病毒灭活疫苗进行免疫佐剂的筛选是十分必要的。在这项研究中,首先从鳜ISKNV感染下制备了灭活病毒疫苗,选择了壳聚糖、poly(I:C)、山莨菪碱和ims1312四种佐剂分别于疫苗混合后进行注射免疫,随后为了研究佐剂增强疫苗的保护效果,分别进行了病理学组织切片,血清中酶活动力学检测,qRT-PCR和个体死亡率实验。主要的研究结果如下:1.壳聚糖佐剂显著增强ISKNV感染后疫苗对肝脾保护效果在病毒攻毒后第7天对每个处理组的肝脏和脾脏分别取样,制备组织切片。在ISKNV刺激下,分别观察各处理组和对照组之间的病理变化和损伤情况。结果发现,poly(I:C)和壳聚糖作为佐剂在肝脏中发挥了更好的增强疫苗的保护效果;同时壳聚糖佐剂有效增强了疫苗对于脾脏的保护作用。综合肝脏和脾脏的观察结果,壳聚糖作为一种新的疫苗佐剂可以有效地提升ISKNV灭活疫苗对于黑色素巨噬细胞中心(MMC)和组织炎症(TI)的保护效果。2.poly(I:C)和壳聚糖佐剂提高了感染过程中血清酶活力由于四种疫苗佐剂均可以一定程度的保护机体的免疫器官,我们选取了 3个代表性的血清酶活动力学指标,分别是酸性磷酸酶(ACP)、过氧化氢酶(CAT)、尿素氮(BUN)。CAT和ACP的测定反映了机体对于病毒和异源物质入侵时分别通过不同的方式来保护鱼体,而BUN的酶活力变化反映了它们对于中肾免疫器官的保护免于病毒和炎症的损害。而在四种佐剂中,poly(I:C)和壳聚糖发挥了更显著去提升疫苗的保护效应。3.壳聚糖和山莨菪碱显著抑制病毒复制并加强抗病毒功能为了检测四种佐剂是否可以增强抑制病毒复制的功能,我们通过对每个处理组在病毒攻毒后一周内的病毒外衣壳蛋白ISKNV007的mRNA的表达量检测,分别对第1天、第4天和第7天进行qRT-PCR实验。从结果中可以发现,随着时间的推移,各组病毒的复制量都在增加,但添加佐剂和疫苗在中肾和脾脏中可以明显减少病毒的复制,抑制了病毒的复制可以提升机体的健康程度,壳聚糖和山莨菪碱混合疫苗后更好地保护机体应对病毒对鱼体的侵入。这有利于机体应对病毒的感染和入侵,有效保护鱼体并且降低ISKNV的损害。4.壳聚糖和山莨菪碱可以有效提升ISKNV感染下鳜的存活率为了探究四种佐剂混合疫苗后对于ISKNV感染下的整体保护效果,我们通过测定病毒侵染下鳜存活率实验来进行四种佐剂的筛选。从结果中我们可以看出壳聚糖和山莨菪碱处理组在个体的攻毒感染下提升的存活率对比疫苗更为显著,而其他两组则没有显著提高。这说明在鳜个体感染实验的结果中,疫苗的提升保护效果有限,当混合了壳聚糖或者山莨菪碱时则可以更有效的保护鳜去抵抗ISKNV病毒的损伤,同时也表明了壳聚糖和山莨菪碱可以作为一种新型的免疫佐剂应用于ISKNV病毒灭活疫苗。综上所述,以上结果表明,在感染ISKNV下这四种免疫佐剂混合后分别起到了不同的保护作用,壳聚糖和poly(I:C)提升了疫苗对于肝脏和脾脏的保护;同时增强了血清中的CAT、ACP和BUN的作用,并且增强了免疫早期的细胞因子水平;而壳聚糖和山莨菪碱显著抑制了病毒的复制并提高了抗病毒功能;壳聚糖和山莨菪碱有效提升了 ISKNV感染下鳜的存活率。这些佐剂在灭活的ISKNV疫苗中有效的提高了疫苗的功能,壳聚糖更是明显的优于其他的佐剂选择,可以作为一种新型的免疫佐剂应用于ISKNV病毒灭活疫苗,并为今后疾病的防治提供了新的途径。