通窍平喘方通过NF-κB/MAPK信号通路治疗小儿哮喘的临床和实验研究

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目的观察通窍平喘方(TQPCF)治疗儿童过敏性哮喘的急性发作期的临床疗效,初步阐明该方通过调控NF-κB/MAPK信号通路调节Th1/Th2失衡治疗哮喘的作用机理;观察TQPCF对哮喘小鼠肺组织、鼻黏膜、体重、炎性细胞及IL-5、IL-13、IFN-γ及(NF-κB)p65、IκBα、p38MAPK和JNK的影响,探讨该方短期和长期干预对哮喘的疗效,进一步证实通窍平喘法基于“肺鼻同治”治疗过敏性哮喘的实验依据。方法临床研究:将符合纳入标准的患儿随机分为对照组和观察组各60例,对照组采用布地奈德合特布他林雾化治疗,观察组在对照组的基础上加用TQPCF口服治疗,收集治疗前后两组的相关资料,包括症状积分、血常规和肺功能(PEF%、F VC%、FEV1%、FEV1/FVC、FEF25%、FEF50%、FEF75%)等,收集血清,检测血清中Ig E、IL-5、IL-13和IFN-γ的分泌量和(NF-κB)p65、p38MAPKmRNA的表达。实验研究:将80只Balb/C小鼠随机分为空白对照(CON)组、哮喘模型(M DL)组、地塞米松(DXM)组和通窍平喘方(TQPCF)组,每组20只。建立过敏性哮喘小鼠模型;于药物连续干预7d和28d后,分两批称重小鼠并予以处死,取小鼠的肺泡灌洗液(Bronchoalveolar Lavage Fluid,BALF)、鼻黏膜组织和肺组织,采用苏木素-伊红(Hematoxylin-Eosin Staining,HE)染色法观察各组小鼠鼻黏膜组织和肺组织的病理改变,用细胞计数法观察各组小鼠BALF中各细胞分类计数,ELISA法检测小鼠BALF中IL-5、IL-13和IFN-γ的含量,RT-PCR法检测对应m RNA的表达;Western Blot法检测小鼠肺组织中(NF-κB)p65、IκBα、p38MAP K、JNK及其磷酸化的蛋白表达;免疫组化染色法观察小鼠肺组织中(NF-κB)p65、IκBα、p38MAPK和JNK的阳性表达。结果临床研究:1.临床疗效:治疗后,观察组主证总积分、兼症总积分和总积分均低于对照组;肺功能检查中,观察组PEF%、FEV1%、FVC%和FEF75%的改善明显优于对照组,中西医临床疗效观察组均优于对照组。2.血清指标比较:治疗后观察组患儿的EOS和Ig E较对照组均有所降低,IL-5、IL-13的分泌较对照组降低;IFN-γ的分泌较对照组升高;(NF-κB)p65和p38MAPK的表达均低于对照组;并且IL-5、IL-13和(NF-κB)p65、p38MAPK之间存在正相关性,IFN-γ和(NF-κB)p65、p38MAPK之间存在负相关性。实验研究:1.药效学结果:经药物干预后,用药组(DXM和TQPCF组)的肺组织和鼻黏膜较哮喘模型组有明显改善;TQPCF组小鼠体重较MDL和DXM组明显升高;DXM和TQPCF组小鼠WBC、EOS、LYM、NEU均低于MDL组,干预7d时,DXM组WBC、LYM、NEU均低于TQPCF组,干预28d时两组无差异。2.免疫机制结果:ELISA和RT-PCR结果显示MDL组小鼠IL-5、IL-13显著升高,IFN-γ显著降低,DXM和TQPCF组对升高的IL-5、IL-13有降低作用,降低的IFN-γ有升高作用,且干预28d时,TQPCF组与DXM组作用趋于一致;WB结果显示:MDL组小鼠(NF-κB)p65、Ik Bα、p38MAPK和JNK及其磷酸化的蛋白表达均明显增加,DXM和TQPCF组有明显的抑制其蛋白表达的作用,干预28d时,TQPCF组与DXM组作用趋于一致;免疫组化法的阳性表达结果与WB法结果一致。结论1.通窍平喘方结合布地奈德合特布他林治疗过敏性哮喘急性发作期,中医症候积分、肺功能、EOS、Ig E和血清学指标的改善效果优于单纯西药组,尤其在过敏性鼻炎等过敏性症状方面的改善疗效肯定,中西医结合疗效更为显著。2.过敏性哮喘小鼠模型存在Th1/Th2失衡以及NF-κB/MAPK信号通路介导的气道炎症改变。通窍平喘方可以有效改善过敏性哮喘小鼠肺组织和鼻黏膜的病理学改变,在抑制NF-κB/MAPK信号通路、调节Th1/Th2的失衡和减少炎性细胞的释放上长期干预效果更佳,具有显著的时间累积效应。
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