【摘 要】
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该研究的目的是克隆两菌与PHB代谢相关的基因,构建PHB代谢突变体,研究PHB代谢基因突变对结瘤、固氮和生长的影响,从而揭示PHB在共生过程中的可能作用及作用机理.分别以苜蓿根
【出 处】
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中国科学院应用生态研究所 中国科学院沈阳应用生态研究所
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该研究的目的是克隆两菌与PHB代谢相关的基因,构建PHB代谢突变体,研究PHB代谢基因突变对结瘤、固氮和生长的影响,从而揭示PHB在共生过程中的可能作用及作用机理.分别以苜蓿根瘤菌Rm1021的phaC基因突变体菌株Rm11144(phaC::Tn5-233)和广宿主根瘤菌NGR234的bdhA突变体菌株NGRPA2为受体菌,通过功能互补,成功地构建的B.japonicum USDA110基因文库中克隆到phbC基因和bdhA基因;完成了两基因全序列测定,在GenBank的登记号分别为AY077580和AY077581.phbC基因由1803个碱基对组成,编码600个氨基酸,分子量66.95kDa蛋白质.bdhA基因由789个碱基对组成,编码262个氨基酸,分子量27.59kDa的蛋白质.通过转座子Tn5诱变、间座子插入和同源重组,分别成功地构建了B.japonicum USDA110 解phbC和bdhA突变体并经Southern杂交和PCR证实.phbC突变体菌株仍能产生一定的PHB,推测在B.japonicum基因组中存在不止一个聚羟丁酸合成酶基因.植株试验显示phbC基因突变对平均单株瘤数和平均单株瘤重有一定影响,而bdhA基因突变对结瘤、固氮未见明显影响.
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