钩端螺旋体溶血素基因的克隆表达及功能的初步研究

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钩段螺旋体病是一种广泛流行的人畜共患疾病,它是由病原钩端螺旋体所引起的。感染后引起人的急性发热和全身组织病理改变,严重者甚至危及生命。在钩端螺旋体病的早期可以看到血管上皮的损伤,多种器官组织上普遍出现出血点,晚期则出现肝细胞坏死、黄疸及全身衰竭。 本论文首先以钩端螺旋体黄疸出血型赖株(Leptospira interrogans serogroup Icterohaemorrhagiae serovar lai type strain #56601)的基因组DNA为模板,通过PCR的方法获得了8种溶血素蛋白(LA1029、LA4004、LA0327、LA3937、LA0378、LA1650、LA3050和LA1027)的基因。然后构建了这8个基因的表达型重组质粒,并在大肠杆菌中成功地表达了这8种溶血素的融合蛋白以及对这8种重组蛋白进行了溶血活性的研究。 实验结果表明这8种溶血素重组蛋白,都能在血平板上产生溶血斑,说明它们都具有溶血活性。其中LA1029,LA1027,LA4004和LA3050这四种蛋白都具有鞘磷脂酶的活性,能水解鞘磷脂生成神经酰胺。 此外,本论文还考察了8种溶血素基因在钩端螺旋体有毒株和无毒株中的转录表达情况。为研究钩端螺旋体溶血素蛋白在钩端螺旋体病致病机理中的作用打下基础。
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