Expansin是近年来发现的迄今惟一能诱导热钝化的离体细胞壁伸展的细胞壁特异性植物内源蛋白质。在一些可侵染或消化植物组织的生命体中也发现了一些类似于expansin的蛋白,被称作expansin-like蛋白。自从expansin蛋白家族发现至今,虽然人们一直尝试在外源表达系统中表达expansin蛋白及expansin-like蛋白,但始终没有成功的报道。近年来人们将注意力集中于寻找微生物来源的expansin-like蛋白,并尝试将其在外源表达系统中重组表达,寄希望其能够代替expansin应用于工业生产中。本论文对里氏木霉Trichoderma reesei来源的未知expansin-like蛋白基因进行了研究,经过数据库比对分析,该蛋白为首次发现的来源于T.reesei的expansin-like蛋白。我们将该基因克隆到E.coli表达系统和毕赤酵母表达系统中进行了异源重组表达,结果显示,虽然该基因能够在E. coli表达系统中有可溶性重组蛋白的表达,但是表达量很低,以木聚糖及阿拉伯木聚糖为底物均检测不到水解酶活性,且检测不到任何expansin-like蛋白活性。由于扩增得到的expansin-like蛋白氨基酸序列与原始Edmam降解法测序获得的两个氨基酸序列YNEAGIWTPKNVF和IYNAEAWYNIVHTGWV有两个氨基酸差异,故合成了氨基酸回复突变的expansin-like基因,回复突变的基因在E. coli表达系统中也有可溶性重组蛋白的表达,但是重组表达的蛋白质依然没有任何expansin-like蛋白活性和多糖水解酶活性,可见该基因在E.coli表达系统中异源重组表达无活性并不是由于氨基酸差异导致的,多肽链的错误折叠及蛋白的糖基化作用等可能是导致重组蛋白表达没有活性的原因。该expansin-like蛋白基因不能在毕赤酵母表达系统中重组表达,在培养基及细胞裂解液中均不能检测到目的蛋白,培养基及细胞裂解液也检测不到相应的水解酶活性及expansin-like蛋白活性。由于该基因来源于丝状真菌,含有大量稀有密码子,我们尝试对该基因序列进行针对毕赤酵母表达系统的密码子优化,但是经过密码子优化的expansin-like蛋白在毕赤酵母表达系统中依旧没有表达。所以,稀有密码子并非导致Trel基因在毕赤酵母表达失败的原因,可能原因是mRNA转录过程的提前终止。所以,我们构建了里氏木霉表达载体,利用里氏木霉强启动子pCBHI,尝试在更高级的丝状真菌表达系统中进行重组表达,以期获得重组的expansin-like蛋白,从而进一步的对这个新的expansin-like蛋白的理化,酶学性质进行研究。