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目的: 目前提取Buffy coat时普遍应用Ficoll离心法，但该法因Ficoll具有细胞毒性而不能应用于临床，本实验研发一种简便和安全的能用于临床的Buffy coat提取法。 方法: 选取20只健康新西兰白兔(16周龄，雄性，体重3.0～3.5kg)进行实验。使用含有2ml柠檬酸钠的注射器从兔子髂前上棘中提取4ml骨髓，将采集的骨髓放置含有Ficoll的试管中并离心为Ficoll组(F)，和放置不含有Ficoll的试管中并离心为新方法组(N);将F组和N组用4℃2000rpm、离心力1000g的离心机离心30分钟。 离心后F管中可见Ficoll和血清间有一个独特的上层血清，其下为Ficoll和血清间的浅黄色液体(BuffyCoat)，底部是红血球;N管顶部血清和红细胞间见一层很薄的BuffyCoat模糊层，从血清下端和红细胞上端与Buffy Coat一起提取约1ml样品，将其置于1ml注射器中进行第二次离心，时间减少到15分钟，离心后可见一个明显的上层血清，其下为深黄色液体(BuffyCoat)和底部的红细胞。 高倍镜下计数F组和N组分离的Buffy Coat中间充质干细胞(Mesenchymal stem cell，MSC)的数量。利用含有10％FBS和1％抗生素-抗真菌溶液的α-MEM的MSC培养基中培养MSC12天后形成成纤维细胞集落形成单位法(Colony forming unit-fibroblast，CFU-f)的数量。采用ELISA法检测各组的转化生长因子-β1(Transforming growth factor-β1，TGF-β1)，血小板衍生生长因子（Platelet derived growth factor，PDGF），成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor，FGF)，胰岛素样生长因子-1(Insulin-like growth factor-1，IGF-1)，内皮生长因子(Endothelial growth factor，EGF)和血管内皮生长因子(Vascular endothelial growthfactor，VEGF)等生长因子和白细胞介素-1β(Interleukin-1β，IL-1β)，白细胞介素(Interleukin-6，IL-6)及肿瘤坏死因子(Tissue necrosis factor-α，TNF-α)等细胞因子。 结果: 1.两组MSC计数比较无统计学差异（2766±345.75 vs2757.25±344.66,P＞0.05）; 2.N组和F组的TGF-β1平均值各为1.29ng/ml和1.28ng/ml; PDGF各为1.49ng/ml和1.42ng/ml; FGF各为1.34ng/ml和1.33ng/ml，IGF-1各为240.94pg/ml和220.96pg/ml;EGF各为164.81pg/ml和161.91pg/ml，VEGF各为37.26pg/ml和35.42pg/ml，两组间上述各生长因子比较均无统计学差异（n=16，均P＞0.05）。 3.N组和F组的IL-1平均值各为866.55pg/ml和870.78pg/ml; IL-6各为218.64和259.78;TNF-α各为1073.29pg/ml和929.84pg/ml，两组间上述各细胞因子比较均无统计学差异(n=16，均P＞0.05)。 结论: 1.采用新方法提取的骨髓源Buffy coat无细胞毒性，而MSCs数量、各种生长因子和炎症因子几乎与Ficoll离心法提取的Buffy coat相似。 2.新方法可以替代旧的Ficoll法，本实验结果为临床应用骨髓Buffy Coat及在组织工程领域的研究提供了的实验依据。