棉铃虫Helicoverpa armigera(H(u∣¨U)bner)是广泛分布于世界各大洲的重要农业害虫。上个世纪以来,棉铃虫对大多数的化学杀虫剂产生抗药性,使对其的防治愈加困难。Bt杀虫晶体蛋白(Insecticidal crystal proteins,ICPs)因其具有对靶标昆虫的高度特异性和对人畜无害的安全性的优点,被人们应用于防治棉铃虫。但随着转Bt基因棉种植面积的不断扩大,转入的Bt毒蛋白在棉花的整个生长期内持续表达,使得棉铃虫在生长期间不断地受到转Bt基因棉的高选择压,存在着棉铃虫对转Bt基因棉产生抗性的风险。一旦棉铃虫对转Bt基因棉产生大范围或较大的抗性,那将是我国甚至世界的棉花生产毁灭性打击,因此,对棉铃虫对转Bt基因棉抗性的检测监测势在必行。检测田间棉铃虫对转Bt基因棉的抗性,可以对棉铃虫的田间种群的抗性发展作评估,对棉铃虫对Bt棉的抗性提供早期预警。棉铃虫对Bt棉的抗性基因频率的检测结果,将能直接指导棉花的种植。本研究的分子检测技术也可以为其他农业害虫的田间检测提供借鉴。传统的生物测定方法早已应用于监测害虫对Bt基因棉的抗性,但是传统的生物测定方法有其制约性,如:无法区分杂合子(sr)和敏感纯合子(ss)、采样量大、需饲养昆虫、费时、费力、灵敏度不够高等。以DNA为基础的抗性检测方法能直接检测到杂合子的抗性等位基因(r),可明显提高抗性检测的灵敏度和效率。基于DNA分子技术的检测技术与传统的需要活虫的生物测定技术相比,拥有很多的优点,如:(1)不管是显性特征还是隐性特征,DNA分子检测技术都可以区分个体是杂合子(sr)还是敏感纯合子(ss);(2)DNA分子检测技术直接检测基因的不同,而不是依赖于观察表型的不同;(3)DNA分子检测技术在害虫的各个生长发育期都可以应用,甚至是死虫也可以应用;(4)在抗性纯合子数量稀少的情况下,DNA分子检测技术比传统的检测方法更有效、更灵敏。本论文通过对比分析了对转Bt基因棉抗性的棉铃虫钙粘素mRNA序列(AY714874)和敏感mRNA序列(AY351904),以及抗性棉铃虫钙粘素基因组DNA序列(AY714875)和敏感棉铃虫钙粘素基因组DNA序列(AY714876)。选择保守的外显子序列区域,设计了5套引物用于检测抗性基因,并进行筛选。利用设计并筛选过的2套引物检测田间棉铃虫因钙粘素突变引起的对转Bt基因棉的抗性。结果表明,所设计的五套引物均能百分百地在棉铃虫室内品系DNA中扩增出清晰的特异性目标条带,但第二套引物的抗性条带和敏感条带,不易区分,不适合做田间检测;第一套引物和第四套引物虽然在棉铃虫室内品系DNA中的扩出率为100%,但是在扩增田间棉铃虫DNA时,有一部分田间棉铃虫DNA能扩增出条带,不适合做田间检测;第三套引物和第五套引物在棉铃虫室内品系DNA中以及田间棉铃虫DNA中的扩出率均为100%,适合于做田间检测。应用第三套引物和第五套引物对采集自河北邱县转Bt基因棉区的1585头棉铃虫进行检测,未发现与室内棉铃虫抗性一致的因钙粘素突变引起的对转Bt基因棉产生抗性的突变类型。