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肝癌的发生是许多基因表达水平的改变导致细胞内出现一系列分子变化的结果。因而从基因水平研究肝癌的癌基因、抑癌基因的变化,寻找差异表达的基因,不仅可以在病理上寻找原因,同时可以为早期诊断和治疗以及预后提供依据。ErbB-3是表皮生长因子家族中的重要成员,而Ebp1 (ErbB-3 binding Protein, Ebpl)是新发现的一种ErbB-3胞内结合蛋白。在外界刺激作用下Ebp1与ErbB-3分离到达核内,可抑制肿瘤细胞的生长增殖并诱导细胞分化。研究表明Ebp1抑制细胞增殖的能力与其调控细胞周期相关基因有关。研究显示,Ebp1基因具有p48和p42两个部分,两者表达对细胞增殖起不同的效应。p48位于细胞质和核内,过度表达促进细胞增值；而p42位于细胞质内,过度表达时将抑制细胞增值。尽管文献报道,Ebp1与乳腺癌、前列腺癌及口腔鳞状细胞癌细胞生长增殖有关,但是其在肝癌中的作用研究尚未见报道。由于绿色荧光蛋白(GFP)可在真核细胞内表达发出绿色荧光,可起到示踪作用,因此,我们利用Northern blot方法观察Ebpl基因mRNA在肝癌细胞中的表达,之后建立pEGFP-C1质粒为载体的pEGFP-C1-Ebp1真核表达质粒,并转染到HEK293细胞,观察Ebp1过表达对细胞生长增殖的影响。首先提取培养的肝癌细胞中提取总RNA进行Northern blot;观察Ebpl基因mRNA的表达,之后利用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增Ebpl基因,并建立Ebpl基因与绿色荧光蛋白(GFP)基因融合表达载体pEGFP-Ebp1;使用脂质体法,将重组的Ebp1:基因转入293细胞,并利用荧光显微镜观察细胞内绿色荧光的表达,转染后第二天开始利用新霉素G418筛选,建立稳定表达目的基因Ebp1的细胞系及分析克隆集落的形成,对阳性表达克隆细胞通过Western blot鉴定Ebp1蛋白的表达。实验结果如下：Northern blot结果显示,与NIH3T3和HEK293细胞相比Hep 3B、Hep G2和Huh-7肝癌细胞系中Ebp1基因mRNA过表达；我们构建了Ebp1与EGFP融合表达载体pEGFPC1-Ebp1,且荧光显微镜下可见被转染的HEK293细胞发出绿色荧光；Western blot鉴定结果稳定表达细胞系过表达Ebpl蛋白；克隆集落形成实验结果,转染目的基因的细胞克隆数多于转染空载体细胞。以上的结果提示：1.构建了Ebpl与GFP基因融合表达载体pEGFPCl-Ebpl,而且建立了稳定表达该真核表达载体的HEK293细胞系；2.肝癌细胞中Ebp1基因mRNA过表达；3. Ebp1的过表达增加HEK293细胞克隆集落形成,表明对细胞生长有促进作用。