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【背景】小亚基核糖体蛋白15a (Ribosomal Protein S15a,RPS15a)位于16p13,属于RPS8家族,全长为7369bp,含有5个外显子,编码区393 bp,编码130个氨基酸、分子量为14.8KDa的蛋白。国内外研究发现核糖体蛋白S15a与肿瘤的关系也比较密切,并且可能在肿瘤的发生发展及化疗药物对肿瘤的治疗中发挥一定的作用。RPS15a在低分化的乳腺原位导管癌和转移癌中表达有差异;在用雌二醇治疗雄激素非依赖性前列腺癌的过程中,RPS15a表达下调。RPS15a还是促进肺癌细胞生长的转化生长因子β1(transforming growth factor beta TGFβ1)敏感基因之一。Adam等证实RPS15a是斑马鱼的癌基因。c-myc基因和胃肠富集Krüppel样因子(KLF4,Krüppel-like factor 4)可分别上调和下调RPS15a的表达。Shend等用mRNA展示技术扫描人类钙调素结合蛋白程序库时发现RPS15a可与钙调素(CaM)结合,从而启动其核糖体装配和翻译进程。此外,我的导师刘杰教授将乙肝病毒X基因(HBX)转染入人肝癌细胞株(HepG2),应用抑制性消减杂交及RACE-PCR全长基因扩增技术,发现小亚基核糖体蛋白S15a能被HBX显著上调;进一步将RPS15a基因转染入肝癌细胞,发现RPS15a可增强肝癌细胞体外增殖第四军医大学硕士学位论文能力,促进肝癌细胞由G1期进入S期,同时还促进肝癌细胞软琼脂中非锚定生长能力,SCID小鼠成瘤能力增强。上述研究均提示RPS15a与肿瘤关系密切,然而RPS15a在肿瘤发生发展中的具体作用及可能的机制还不清楚。我们利用生物信息学预测发现RPS15a在胃癌癌组织中的表达显著高于正常组织,提示RPS15a可能在胃癌的发生发展中起了一定的作用。【目的】探讨RPS15a在胃癌中的表达及意义;阐明RPS15a基因表达产物对胃癌细胞系SGC7901生物学特性的影响。【方法】(1)免疫组化方法研究RPS15a在胃癌及癌旁组织中的表达情况,并分析RPS15a与胃癌患者临床病理资料之间的关系。(2)Western blot方法检测胃癌细胞和永生化胃粘膜上皮细胞RPS15a蛋白的表达。(3)RPS15a真核表达载体转染胃癌细胞系SGC7901,G418对转染细胞进行稳定筛选并克隆化,从蛋白水平鉴定转染细胞。(4)MTT法绘制转染细胞的生长曲线;流式细胞术检测RPS15a对胃癌细胞周期分布的影响。(5)Transwell侵袭小室法检测转染细胞体外迁移和侵袭能力。【结果】(1)RPS15a蛋白在胃癌组织中阳性率为78.0% (78/100),在癌旁组织中阳性率为44.0% (44/100)。RPS15a蛋白在胃癌组织中的表达明显高于癌旁组织(P<0.05),且与胃癌组织浆膜浸润、淋巴结转移有明显相关性(P<0.05)。(2)RPS15a蛋白在四种胃癌细胞系中均有表达,在永生化的胃粘膜上皮细胞中微量表达。(3)转染pcDNA3-RPS15a正义载体的SGC7901细胞生长速度显著快于空载体对照和亲本细胞(P<0.05)。( 4 )转染pcDNA3-RPS15a载体的SGC7901细胞进入S期的比例为30.6%,显著高于14.7%(SGC7901,P<0.05)和19.6%( SGC7901-pcDNA3,P<0.05)。RPS15a转染使SGC7901细胞的增殖指数增加了15.9%(SGC7901-pcDNA3,P<0.05)和10.7%(SGC7901,P<0.05)。(5)RPS15a转染使SGC7901的迁移细胞数增加了66.7%(SGC7901-pcDNA3,P<0.05)和59.2%(SGC7901,P<0.05);使SGC7901的侵袭细胞数增加了55.7%(SGC7901-pcDNA3,P<0.05)和61.3%(SGC7901,P<0.05)【结论】(1)RPS15a在胃癌组织中的表达显著高于癌旁组织,其表达水平与胃癌组织的浸润深度和淋巴结转移相关。(2)RPS15a可以促进胃癌细胞增殖及胃癌细胞G1/S期转化,加速细胞周期进程,增强胃癌细胞体外迁移和侵袭能力。