长链非编码RNA HOTAIR和EZH2在早期胚胎停育绒毛组织中的表达及相关性研究

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目的:早期胚胎停育(early embryo growth arrest)发病率高,病因复杂,是一种严重影响妇女身心健康的疾病。本研究通过采集临床病例资料,并检测妊娠早期胚胎停育绒毛组织中长链非编码RNA HOTAIR和EZH2的表达,探讨HOTAIR和EZH2在早期妊娠胚胎停育发生机制中的作用,为孕早期胚胎停育的发病机制研究提供一种新的实验理论依据。方法:本研究通过收集2017年10月~2018年02月于张家港市第一人民医院计划生育门诊流产的患者在无菌条件下,予清宫术时获取的绒毛组织作为实验样本。选取B超确诊胚胎停育患者23例为实验组,同期同孕周自愿终止妊娠患者24例为对照组。入组患者既往均无全身各系统疾病,否认有毒有害物接触史,妇科检查排除生殖道炎症,夫妻双方均无染色体异常。1.对实验组和对照组的一般资料及临床检验数据:年龄、孕次、孕囊直径、凝血功能、生殖内分泌激素、甲状腺功能相关激素等进行统计学分析;2.对收集的绒毛样本进行Total RNA提取和纯化。采用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(Real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)检测实验组和对照组绒毛组织中HOTAIR和EZH2mRNA的表达情况,对目的基因进行扩增,统计实验数据并进行分析;3.免疫组织化学法检测实验组与对照组绒毛组织中EZH2蛋白的细胞定位及表达情况。结果:1.实验组和对照组患者的年龄、孕次、孕囊直径、凝血功能分析比较差异无统计学意义(P>0.05);生殖内分泌激素检测结果显示:实验组FSH与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05),实验组E2、P、LH与对照组相比明显降低(P<0.05);甲状腺功能相关激素检测结果显示:实验组FT3、FT4与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05),实验组TSH与对照组相比明显升高(P<0.05)。2.RT-PCR检测结果显示:实验组绒毛组织中HOTAIR的表达高于对照组,但P>0.05;EZH2 mRNA的表达量明显低于对照组(P<0.05)。Pearson相关性分析显示:胚胎停育绒毛组织中,HOTAIR与EZH2mRNA表达水平的相关性系数没有统计学意义(r=-0.116,P=0.597>0.05);3.免疫组化检测结果显示:EZH2蛋白在绒毛组织中主要为细胞核染色,并伴有部分细胞质着色,EZH2蛋白在实验组绒毛组织中的表达强度显著低于对照组(P<0.05)。结论:1.本实验通过对病例一般资料及临床检验数据分析,验证了生殖内分泌激素及促甲状腺素与胚胎停育的相关性。2.胚胎停育和正常流产绒毛中均可检出HOTAIR、EZH2 mRNA的表达,胚胎停育患者绒毛组织中HOTAIR的表达量有升高趋势,EZH2的表达量显著降低,两者可能参与了早期胚胎停育的发病过程。3.HOTAIR、EZH2在胚胎停育绒毛组织中的表达量无明显的相关性,推测可能在多梳蛋白抑制复合体2(polycomb repressiv complex2,PRC2)依赖的调节途径中,HOTAIR通过结合EZH2使其发生功能改变,从而参与了胚胎停育的发生。
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