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蓬莪术(Curcuma phaeocaulis Val.)为姜科植物的干燥根茎,是中药莪术的主要来源之一,收载于《中国药典》2015年版,具有行气破血、消积止痛之功效,为"破血消癥"要药。中医临床常用其醋制品,醋制后既增强"破积消坚,去积聚癖块"之效,又缓其峻猛药性。目前对川产道地药材蓬莪术醋制的研究较少,对其炮制原理有待于深入阐明。目的本文以醋制为切入点探寻蓬莪术醋制过程有效成分含量变化规律及其影响因素,基于蛋白质相互作用网络探明醋莪术其作用机制,从而结合物质基础变化和药理效应机制两方面丰富蓬莪术醋制增效的科学内涵。方法与结果1.取蓬莪术生品,分别以9°米醋、纯化水、9%醋酸水溶液炮制,得到其醋制品、空白品、参照品,同时测定炮制过程中不同时间点的pH值,结果发现醋制组和参照组pH值由3.8左右缓慢升至4.8左右,空白组由7.1左右降至6.3左右,醋制组和参照组pH值远低于空白组。醋制组和参照组的情况极为接近,两者无显著差异;然后煎煮蓬莪术生品、醋制品、空白品和参照品,得各样品的煎液,同样测定煎煮过程中各煎液不同时间点的pH值,结果发现醋制组和参照组依然低于空白组及生品组,并且均小于6,而醋制组则略低于参照组。2.建立HPLC同时测定蓬莪术3个姜黄素类成分姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素和4个挥发油类成分莪术二酮、莪术醇、吉马酮、β-榄香烯含量的方法;然后测定各组蓬莪术样品,发现挥发油类成分相对姜黄素类成分含量较高,但经过炮制后均降低较多;醋制品及参照品的姜黄素类成分含量比生品略低,且醋制品比参照品略高,但空白品的姜黄素含量降低较多。3.建立以刀豆蛋白A诱导的肝炎模型小鼠,以联苯双酯(200mg/kg)为阳性对照,各给药组分别灌胃相应药物,即蓬莪术生品(1.3g/kg)、蓬莪术醋制品(1.3g/kg)、姜黄素(200mg/kg)、双去甲氧基姜黄素(200mg/kg),测定其肝脏指数、脾脏指数、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、一氧化氮(NO)含量、超氧化物歧化酶(T-SOD)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)等反映肝炎的指标,结果各给药组均较模型组有不同程度的改善,其中蓬莪术醋制品药效接近阳性对照药联苯双酯,且优于生品,其利肝之效增强。4.基于蛋白质相互作用网络(PPI)阐释蓬莪术醋制作用机制。从STITCH4.0数据库和ChEMBL数据库对蓬莪术所含化合物进行检索,分别获得了姜黄素95个作用靶点、去甲氧基姜黄素27个作用靶点、双去甲氧基姜黄素7个作用靶点、环庚三烯酚酮11个作用靶点以及莪术二酮、β-榄香烯、异莪术醇各1个作用靶点,利用Cytoscape软件构建蓬莪术蛋白质相互作用网络,包含723个节点和2726条边,拓扑性质分析表明所建网络稳定可靠,模块分析得到25个功能模块,包含免疫调节过程、TGF-β信号通路过程等;多成分协同作用机制分析发现,姜黄素和双去甲氧基姜黄素共同作用与TGF-β信号通路生物过程,调节TGFβ1、TGFβR1、TGFβR2、SMAD3、SMAD4、ZFYVE9等蛋白质发挥抗肝炎的作用。5.基于Western Blot和qPCR技术,检测空白组、模型组及各给药组小鼠肝脏中TGFβ1、Smad7、Smad2/3基因的RNA表达量及其蛋白质表达量,结果发现蓬莪术生品及其醋制品均能调控TGF-β信号通路,其中姜黄素和双去甲氧基姜黄素是主要有效成分。结论本论文发现炮制过程中挥发油类成分含量降低较多,但炮制辅料米醋能针对性地保护蓬莪术中的有效成分姜黄素,避免炮制过程中的损失,初步证实了蓬莪术醋制使有效成分"存其不足,去其有余"的炮制内涵,而姜黄素类成分正是蓬莪术利肝抗炎的有效成分,通过调控TGF-β信号通路达到作。本论文丰富了蓬莪术醋制增效的科学内涵,为中药炮制机制研究提供了新思路。