研究背景在世界范围内,尽管胃癌的发生率和死亡率在不断下降,它仍是引起恶性肿瘤死亡的第二大原因,并严重威胁着人类的健康。在国内,胃癌是常见的恶性肿瘤之一,居我国恶性肿瘤死亡的首位。胃癌的发生发展是一个多因素、多阶段、多步骤共同作用的结果。在此过程中,胃粘膜经历一系列不同的病理学变化,从慢性浅表性胃炎到慢性萎缩性胃炎,然后为肠上皮化生,进而演变为异型性增生,最后发展为胃癌。胃癌按其发展过程可分为早期胃癌和进展期胃癌。早期胃癌是指那些局限于粘膜及粘膜下层的胃癌。随着内镜技术的发展及普遍应用,早期胃癌的发现率明显提高,使部分胃癌患者能够获得早期治疗的机会,故早期胃癌的五年生存率高达90%以上。进展期胃癌则侵犯至固有肌层甚至是浆膜层的。与早期胃癌相比,进展期胃癌一般存在远处转移,即使未发现转移,手术切除后出现复发和远处转移的几率也明显提高,故进展期胃癌的预后较差。目前,大多数确诊的胃癌患者均处于进展期,即使有机会手术,侵袭和转移仍是导致患者死亡的主要因素。故胃癌的早期诊断和治疗显得尤为重要。然而,目前尚无胃癌特异性的肿瘤标志物,故胃癌的早期诊断率仍较低。目前,随着肿瘤分子技术的快速发展和研究的不断深入,人们发现在胃癌发生发展过程中存在多种基因和蛋白表达异常,这些异常表达的基因、蛋白与肿瘤浸润深度、大小、分化程度、临床分期、有无转移及预后相关,它们有可能为胃癌的诊断及临床治疗带来新的突破。因此,研究胃癌发生发展过程中有关基因和蛋白,具有重要的意义。内质网蛋白57(Endoplasmic Reticulum Protein57, ERp57)是一种糖蛋白特异性的巯基氧化还原酶,属于蛋白质二硫化物异构酶家族成员之一。在结构上,该蛋白存在多个蛋白酶修饰位点、假想的核定位信号、内质网滞留信号和一个信号肽。在功能上,该蛋白作用广泛,如参与新生糖蛋白的折叠和转运,参与MHCⅠ类分子的组成等等。ERp57广泛分布于各种组织及器官中,在不同部位表达存在差异。在多种情况下,ERp57基因可被诱导激活,如内质网应激诱导剂、病理状态、实体肿瘤微环境变化及糖基化拮抗剂等。其中,实体肿瘤微环境变化包括低糖、低pH值、低氧等。众所周知,癌组织中心部位不仅低氧,且低糖,故ERp57在多种肿瘤组织中呈高表达趋势。研究报道ERp57在食管鳞癌、卵巢癌、乳腺癌、肺癌等组织中表达上调,在结肠癌、肝癌等组织中表达下调。在正常大鼠肾脏细胞转入病毒致癌基因转化子后,发现ERp57的蛋白水平升高。这些均证实ERp57与肿瘤的发生发展密切相关。迄今为止,国内外关于ERp57在胃癌组织中的研究较少,且尚未形成统一的认识。Celli等研究发现ERp57基因在胃癌组织中的表达高于配对癌旁组织,而Charles等报道ERp57蛋白在胃癌组织中表达下降或缺失,其表达与肿瘤浸润较深及晚期疾病相关。在国内尚无文献报道ERp57在胃癌组织中的研究,仅有一篇文献报道,在筛选胃癌血清标志物时发现胃癌患者血清中ERp57蛋白的表达量较正常人升高。因此,研究胃癌组织中ERp57的表达与分布情况,分析ERp57的表达与胃癌临床病理特征的关系,探讨ERp57在胃癌发生发展中的作用,具有一定的临床意义。此外,目前的研究结果显示胃癌组织中ERp57基因与蛋白的表达趋势相反。这一现象亦存在肝癌组织中,他们认为这是由于肝癌组织中ERp57被裂解成多肽片段后分泌至血液,从而导致肝癌组织中蛋白水平下降。然而,胃癌组织中ERp57基因与蛋白表达是否一致,尚需进一步研究分析。因此,同时对胃癌组织中ERp57基因与蛋白表达水平进行研究,具有一定的必要性。研究目的：从基因水平及蛋白水平检测ERp57在胃癌组织与配对癌旁组织中的表达水平,同时检测其在胃癌组织及配对癌旁组织中的分布情况,分析胃癌组织中ERp57表达与胃癌临床病理特征的相关性,探讨其在胃癌发生发展中的作用,为探索新的胃癌防治方法提供思路。材料和方法：1.收集南方医科大学附属南方医院2010年5月至2010年9月间对胃癌患者施行的手术切除后标本30例,包括胃癌组织标本30例,配对癌旁组织标本(癌旁3-5cm外)30例,标本均取自术前未接受放化疗的胃癌患者,全部病例均经术后病理证实为胃癌；2.运用半定量逆转录-聚合酶链式反应技术(RT-PCR)及蛋白质印迹方法(Western blot)分别从基因水平及蛋白水平检测胃癌组织及配对癌旁组织中ERp57的表达水平,并进一步分析ERp57表达与胃癌的发生及临床病理特征之间的关系；3.运用免疫组织化学方法检测胃癌组织及配对癌旁组织中ERp57的亚细胞定位及分布情况；4.统计学分析：所有数据均采用SPSS13.0统计软件进行统计分析,结果以均数±标准差(x±S)的方式表示,所有的统计结果以P<0.05为具有显著性差异。胃癌组及癌旁组中ERp57含量比较采用配对样本t检验(Paired-Sample T Test),胃癌不同部位间ERp57表达差异比较采用多样本均数比较的方差分析(ONEWAY-ANOVA),其他组间均数比较均采用两样本均数的t检验(Independent-Sample T Test)结果：1.在30例胃癌组织中,21例(70%)癌组织ERp57 mRNA表达水平高于癌旁组织(T/N>1),1例(3.33%)癌组织与癌旁组织表达水平相当(T/N≈1),8例(26.67%)为癌旁组织表达高于癌组织(T/N<1)。选用配对样本t检验进行统计分析,结果显示胃癌组ERp57 mRNA水平(0.956±0.370),高于癌旁组(0.748±0.291),两者间的差异有统计学意义(P<0.05)2.在30例胃癌组织中,4例(13.33%)癌组织ERp57蛋白表达水平高于癌旁组织(T/N>1),4例(13.33%)癌组织与癌旁组织表达水平相当(T/N≈1),22例(73.34%)为癌旁组织表达高于癌组织(T/N<1)。选用配对样本t检验进行统计分析,结果显示胃癌组ERp57蛋白水平(0.635±0.361),低于癌旁组(0.899±±0.245),两者比较存在显著性差异(P<0.05)；3.在胃癌浸润深度为肌层以内者,ERp57基因及蛋白相对表达量分别为1.191±0.437、0.879±0.404,浸润至浆膜及以上者,其表达量分别为0.870±0.311、0.547±0.308,差异有统计学意义(P<0.05)。在胃癌临床分期为Ⅰ、Ⅱ期者,ERp57基因及蛋白相对表达量为1.121±0.348、0.816±0.332,分期为Ⅲ、Ⅳ期者,其表达量分别为0.790±0.323、0.454±0.300,差异有统计学意义(P<0.05)。在其他病理特征组之间,ERp57基因及蛋白表达均无统计学意义(P>0.05)。即胃癌组织中ERp57表达水平与肿瘤的浸润深度、疾病的临床分期相关,与性别、年龄、肿瘤原发灶部位、大小、分化程度、局部淋巴结转移及远处转移均无关；4.ERp57阳性反应呈棕黄色。在胃癌组织中,阳性表达信号主要分布于癌细胞的胞浆中。在配对癌旁组织中,其表达部位主要位于胃腺体的下2/3,阳性信号存在于胞浆中,主要分布于主细胞中,壁细胞着色较浅或不着色。结论：1.ERp57蛋白表达于人的胃粘膜中,在胃癌组织中表达下调,其表达可能与胃癌的发生发展相关。胃癌组织中ERp57的表达可能可作为判断胃癌病变程度以及预测肿瘤浸润趋势的潜在的分子指标；2.在胃癌组织中,ERp57基因表达与蛋白表达的趋势不一致,推测其可能的原因为胃癌组织中ERp57完整片段被蛋白酶裂解成多肽片段或者以整体蛋白的形式,被分泌至血液或体液,从而导致胃癌组织中ERp57蛋白表达水平下调,然而目前这只是我们的一种推测,尚需要进一步的研究来证实；3.ERp57蛋白主要表达于细胞的胞浆中,在配对癌旁组织中,ERp57广泛分布于胃腺管细胞内,主要存在于胃主细胞中,胃壁细胞表达低下或缺失,这种差异表达的情况可能与胃主细胞和壁细胞的细胞功能不同相关,且ERp57可能在胃主细胞合成、分泌胃蛋白酶原的过程中发挥作用。