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目的:研究地塞米松对Dectin-1/Syk介导的角膜上皮细胞抗真菌固有免疫的影响,探讨地塞米松抑制抗真菌固有免疫的机制。
方法:烟曲霉菌菌丝抗原刺激未处理或地塞米松预处理的永生化人角膜上皮细胞(HCECs),RT-qPCR及酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组细胞中TNF-αmRNA及蛋白的表达。凝胶多糖(0.2mg/ml)刺激未处理或地塞米松(10-6M、10-7M、10-8M)、昆布多糖(0.3mg/ml)、白皮杉醇(10-8M)预处理的HCECs,刺激8h或24h后收取细胞或上清液,用RT-qPCR、WesternBlot检测各种细胞中Dectin-1mRNA及蛋白的表达,WesternBlot检测各种细胞中Syk的磷酸化水平,RT-qPCR、ELISA检测各组细胞培养上清中TNF-α、IL-1βmRNA水平及蛋白浓度。
结果:地塞米松预处理HCECs组,烟曲霉菌菌丝刺激后TNF-αmRNA及蛋白表达水平较烟曲霉菌刺激组显著降低(P<0.05)。与凝胶多糖刺激组比较,10-6M、10-7M、10-8M地塞米松分别预处理HCECs1h后给予相同浓度凝胶多糖刺激,Dectin-1mRNA和蛋白的表达量均显著降低(P<0.01),且10-6M地塞米松抑制作用最大(P<0.05)。与凝胶多糖刺激组比较,10-6M地塞米松预处理HCECs1h后给予相同浓度凝胶多糖刺激30min,Syk磷酸化水平明显下降(P<0.01)。与凝胶多糖刺激组比较,10-6M地塞米松预处理HCECs1h后给予相同浓度凝胶多糖刺激,TNF-α、IL-1βmRNA和蛋白的表达水平均降低(P<0.01)。
结论:地塞米松抑制Dectin-1/Syk信号通路介导的人角膜上皮细胞的抗真菌固有免疫。
方法:烟曲霉菌菌丝抗原刺激未处理或地塞米松预处理的永生化人角膜上皮细胞(HCECs),RT-qPCR及酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组细胞中TNF-αmRNA及蛋白的表达。凝胶多糖(0.2mg/ml)刺激未处理或地塞米松(10-6M、10-7M、10-8M)、昆布多糖(0.3mg/ml)、白皮杉醇(10-8M)预处理的HCECs,刺激8h或24h后收取细胞或上清液,用RT-qPCR、WesternBlot检测各种细胞中Dectin-1mRNA及蛋白的表达,WesternBlot检测各种细胞中Syk的磷酸化水平,RT-qPCR、ELISA检测各组细胞培养上清中TNF-α、IL-1βmRNA水平及蛋白浓度。
结果:地塞米松预处理HCECs组,烟曲霉菌菌丝刺激后TNF-αmRNA及蛋白表达水平较烟曲霉菌刺激组显著降低(P<0.05)。与凝胶多糖刺激组比较,10-6M、10-7M、10-8M地塞米松分别预处理HCECs1h后给予相同浓度凝胶多糖刺激,Dectin-1mRNA和蛋白的表达量均显著降低(P<0.01),且10-6M地塞米松抑制作用最大(P<0.05)。与凝胶多糖刺激组比较,10-6M地塞米松预处理HCECs1h后给予相同浓度凝胶多糖刺激30min,Syk磷酸化水平明显下降(P<0.01)。与凝胶多糖刺激组比较,10-6M地塞米松预处理HCECs1h后给予相同浓度凝胶多糖刺激,TNF-α、IL-1βmRNA和蛋白的表达水平均降低(P<0.01)。
结论:地塞米松抑制Dectin-1/Syk信号通路介导的人角膜上皮细胞的抗真菌固有免疫。