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目的:随着中医中药的发展,中医中药在肿瘤预防及治疗中的应用愈加广泛。临床工作中,常应用十字花科中药(白芥子、莱菔子、葶苈子等)温阳化痰、行气散结利水等功效治疗恶性肿瘤疾病及其并发症。现代医学研究报道中药单体化合物苯乙基异硫氰酸酯(PEITC)为十字花科部分中药中常见的生物活性化合物。PEITC为氧化激动剂,可产生活性氧簇(ROS)。研究表明,活性氧簇具有抗肿瘤作用。本研究首先回顾性分析中医文献中关于口腔鳞状细胞癌临床诊治的记载,然后对现今160例临床口腔鳞状细胞癌患者进行中医证候分型,探讨十字花科部分中药治疗口腔鳞状细胞癌的可能性;最后进一步应用PEITC作用于口腔鳞状细胞癌细胞株Cal-27细胞,探究其对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、细胞生物学特性、细胞凋亡及细胞自噬的调控以及其作用机理。方法:1.临床研究:选取160例口腔鳞状细胞癌患者,统计患者一般情况、中医症状及舌苔脉象,采用频数分析及聚类分析法,探讨现今口腔鳞状细胞癌中医证候分型。2.实验研究:应用PEITC作用于口腔鳞状细胞癌细胞株Cal-27细胞,应用不同浓度的PEITC处理Cal-27细胞,观察Cal-27细胞增殖能力的差异,寻找实验所需最佳药物浓度。使用荧光探针检测不同浓度的PEITC处理Cal-27细胞后细胞内活性氧簇水平的变化。采用细胞划痕实验、细胞集落实验、Transwell迁移及侵袭实验检验PEITC对口腔鳞状细胞癌生物学特性的影响。通过Western Blot法检测PEITC对Cal-27细胞凋亡蛋白、自噬蛋白及相关信号通路蛋白分子表达的影响。使用透射电镜检测细胞内自噬小体的形成。采用Real-time PCR技术检验PEITC对细胞凋亡相关基因及自噬相关基因相对表达量的影响。结果:1.临床研究结果:(1)经统计160口腔例鳞状细胞癌患者性别、年龄、发病部位,男女比例为:1.76:1;患者年龄均数为60.29±11.35岁,中位数值为61岁;发病部位主要为舌部、下颌部及牙龈部。(2)中医症状和体征经频数分析及聚类分析后,将口腔鳞状细胞癌中医证候归为四类,分别为:阳虚寒凝证(70人,43.75%)、阴虚证(9人,5.63%)、火热证(18人,11.25%)以及气滞血瘀证(63人,39.38%)。2.实验研究结果:(1)PEITC可以抑制口腔鳞状细胞癌Cal-27细胞增殖的能力(P<0.05),且呈时间-浓度依赖性。(2)PEITC可以抑制口腔鳞状细胞癌Cal-27细胞的迁移、侵袭及克隆能力(P<0.05)。(3)PEITC可促进口腔鳞状细胞癌Cal-27细胞中活性氧簇的产生和堆积。(4)PEITC可通过ROS途径高表达细胞间粘附蛋白E-cadherin及抑制细胞迁移蛋白Vimentin的表达,且差异具有统计学意义(P<0.05)。(5)PEITC可以通过ROS途径诱导细胞凋亡的发生(P<0.05),也可通过Akt信号通路,抑制Akt蛋白活性,从而促进细胞凋亡(P<0.05)。(6)PEITC作用于口腔鳞状细胞癌Cal-27细胞后,通过透射电镜可观察到细胞内自噬小体的产生,Western Blot及Real-time PCR结果证实PEITC可以激活口腔鳞状细胞癌Cal-27细胞自噬的发生,并提高细胞自噬水平,促进肿瘤细胞死亡(P<0.05)。结论:现代口腔鳞状细胞癌中医证候分型可见,阳虚寒凝证、气滞血瘀证及火热证为主要证候,阴虚证在口腔鳞状细胞癌中较为少见。十字花科部分中药性味辛苦温,具有温阳化痰、软坚散结通络之功,临床应用及药性理论推断均表明十字花科部分中药具有治疗病机为阳虚寒凝证及气滞血瘀证肿瘤疾病的作用。进一步体外细胞实验证实十字花科部分中药单体化合物PEITC具有抑制口腔鳞状细胞癌Cal-27细胞增殖、迁移、侵袭及克隆能力,PEITC可以通过ROS途径促进Cal-27细胞凋亡的发生,且还可以通过Akt信号通路诱导细胞凋亡。PEITC还可以通过激活Cal-27细胞自噬的发生,提高细胞自噬水平,从而促进肿瘤细胞死亡。本论文旨在为现今口腔鳞状细胞癌中医证候分型提供临床研究依据,为PEITC抗口腔鳞状细胞癌作用提供体外实验研究数据,为十字花科部分中药在口腔鳞状细胞癌中的应用提供基础实验研究依据。