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背景:肝缺血再灌注损伤(HIRI)是导致肝移植后移植物无功能或功能不全的最常见原因,也是造成边缘性肝脏供体利用受限的主要原因之一。HIRI的发生机制很复杂,已知道的包括无氧代谢酸中毒、细胞内钙超载,氧化应激等一系列因素导致的肝细胞的非特异性炎症损伤。乌司他丁(UTI)是一种胰蛋白酶抑制剂,它可以通过多个环节抑制炎症介质的释放,上调抗炎因子的表达,稳定溶酶体膜,减轻细胞的坏死及凋亡,可能对HIRI有一定抑制作用。目的:本研究旨在进一步探讨UTI在肝脏冷保存过程中对肝细胞的保护作用的最佳浓度与时间及其作用机理,进一步探讨UTI对延时冷保存肝脏供体移植后肝功能的影响,以开发其在利用肝脏边缘性供体方面的作用和应用价值。方法:利用纯系C57BL/6(B6)小鼠,建立肝冷缺血损伤和自体原位肝移植模型(OLTx),应用不同浓度的UTI乳酸林格式灌注液行肝脏灌注及体外不同时间冷保存分别检测肝脏酶学变化、肝组织形态结构、肝细胞凋亡及肝脏中细胞因子和凋亡相关基因的表达;利用自体原位肝移植模型观察UTI对在体外延时保存的肝脏供体的保护作用及移植物存活时间。结果:1、UTI对肝脏冷缺血损伤具有明显的保护作用,其作用与UTI的浓度有相关性,最佳作用浓度为1000 U/ml,肝脏ALT、AST和LDH释放在加入UTI的保存液组明显减低;2、体外冷保存6小时后UTI组肝细胞水肿及空泡样变性等明显减轻,肝细胞膜的完整性及肝脏组织形态结构明显好于对照组;3、同时,UTI组中肝细胞凋亡数量及促凋亡基因Caspase-3和Bax的表达明显减少,抗凋亡基因Bcl-2的表达明显升高;4、此外,UTI组肝组织炎性细胞因子IL-6、TNF-α、IFN-γ的产生明显减少,炎症抑制因子IL-10的产生明显升高;5、更有意义的是UTI加入到肝保存液中可明显改善体外延时冷保存的肝脏移植物的存活时间,与不加UTI组相比,加入UTI组延时冷保存1小时的肝移植物在术后3天和7天的存活率分别为80%和50%,明显高于对照组的40%和20%(P<0.05)。6、移植后1h、6h、18h后,无论是UTI加入肝保存液组还是联合UTI受体治疗(RT)组在血清酶学及病理学改变上明显轻于不加UTI的对照组;7、同时,与对照组相比,UTI组和UTI+RT组在肝细胞凋亡数量及Caspase-3和Bax的表达明显减少,Bcl-2的表达明显升高;8、此外,UTI组和UTI+RT组促炎因子IL-6、TNF-α、IFN-γ表达水平更低,抗炎因子IL-10表达水平更高;9、18h后各组损伤均有所恢复,总体看来,与对照组和UTI组相比,UTI+RT组对损伤的保护效果更为显著。结论:UTI对肝冷缺血再灌注损伤有明显的保护作用,可显著提高延时冷保存肝脏移植物的存活率。其机理可能是通过抑制肝脏炎症因子和凋亡相关蛋白的释放,减少肝细胞凋亡,进而保护肝脏功能。