目的:(1)体外培养人牙龈成纤维细胞,建立该细胞模型,为进一步研究提供实验基础。(2)观察不同浓度IL-1β和IL-6干预下,角质细胞生长因子(keratinocyte growth factor,KGF)在人牙龈成纤维细胞炎症损伤过程中基因表达水平的变化,进一步明确KGF在牙周病发生发展过程中可能的作用。方法:(1)取液氮冻存的人牙龈成纤维细胞复苏传代培养,并进行形态学和免疫学鉴定,观察冻存后复苏的细胞性能,从而建立稳定的体外细胞模型。(2)选择生长稳定、形态良好的第5~8代人牙龈成纤维细胞,分别用浓度为0ng/ml、0.1ng/ml、0.5ng/ml、1ng/ml、5ng/ml、10ng/ml的IL-1β和0ng/ml、0.1ng/ml、0.5ng/ml、1ng/ml、5ng/ml、10ng/ml的IL-6对人牙龈成纤维细胞进行干预,建立炎症损伤的牙龈成纤维细胞模型,采用逆转录多聚酶链反应法(RT-PCR)检测KGF基因在各实验组的表达情况,利用医学图像分析系统对检测结果进行图像分析及数据采集,然后运用单因素方差分析方法,对不同浓度IL-1β及IL-6干预后的人牙龈成纤维细胞中KGF基因的表达情况进行统计学分析。结果:(1)液氮冻存的人牙龈成纤维细胞经复苏、传代培养,5~8代细胞生长稳定,活力良好,倒置显微镜下观察细胞呈典型的成纤维样细胞形态,为星形或长梭形。免疫组织化学显示细胞抗波形丝蛋白染色呈阳性,抗角蛋白染色呈阴性。(2)RT-PCR结果显示,在基因水平上,正常人牙龈成纤维细胞中KGF基因呈弱表达,而炎症损伤后的细胞模型组中,随着IL-1β和IL-6的浓度增高,KGF基因表达呈逐渐增高的趋势。结论:(1)复苏后传代培养的细胞符合人牙龈成纤维细胞的形态学和免疫学特征,细胞生长稳定,活力良好,可以作为人牙龈成纤维细胞模型为后续研究提供实验基础。(2)本实验从基因水平研究发现,KGF参与了IL-1β及IL-6引发的人牙龈成纤维细胞的炎症损伤过程,有可能在牙周病的发生发展中起着重要作用,为深入解析牙周病的发病机制提供了新的实验依据。