重组质粒pEGFP-GPC3的构建及其抗小鼠肝癌研究

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目的:构建稳定表达GPC3的真核质粒pEGFP-GPC3;检测pEGFP-GPC3转染的小鼠骨髓来源树突状细胞(DC)能否激活荷瘤小鼠脾LC对小鼠H22肝癌细胞(H22细胞)产生特异性杀伤作用;了解pEGFP-GPC3转染的DC对荷瘤小鼠体内H22细胞增殖的影响。方法:构建真核表达质粒pEGFP-GPC3,并转染DC,验证其在DC中高表达磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC3)。建立H22细胞荷瘤小鼠模型并随机分A、B、C三组,分别予腹腔注射pEGFP-GPC3转染的DC、pEGFP-N1转染的DC、及生理盐水,提取各组小鼠脾淋巴细胞(脾LC)检测CTL活性,取各组小鼠肿瘤称量瘤重并计算抑瘤率。结果:成功构建的真核质粒pEGFP-GPC3,其转染DC后,Western blot分析发现相对分子量大小约为67000的蛋白条带;比较A组小鼠脾LC对H22细胞、小鼠C127乳腺癌细胞(C127细胞)的杀伤率:A组>B组(t=17.365,P<0.01),比较R组小鼠脾LC对H22细胞、C127细胞的杀伤率无明显差异(t=0.654,P>0.05),比较C组小鼠脾LC对H22细胞、C127细胞的杀伤率也无明显差异(t=1.291,P>0.05),分别比较A、B、C三组脾LC对H22细胞杀伤率:A>B>C(F=587.658,P<0.01);分别比较三组小鼠瘤重:A<B<C,差异有统计学意义(F=1.948E,P<0.01)。以C组作为对照组,计算A、B组抑瘤率分别为:56.91%、17.19%;结论:本实验成功构建携带GPC3基因的真核质粒,成功转染DC,并检测其在DC中表达;GPC3基因转染的小鼠DC能够激活荷瘤小鼠脾LC对小鼠肝癌的特异性免疫应答,在体外杀伤试验中,被激活的小鼠脾淋巴细胞对H22细胞有高效杀伤作用;GPC3基因转染的DC能诱发荷瘤小鼠机体产生特异性抗小鼠肝癌免疫,抑制体内肿瘤生长。
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