【摘 要】
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利用RACE技术从南极鱼(Dissostichus mawsoni)cDNA文库中克隆得到三个耐寒相关基因,分别命名为MsCD(Medium-chain specific acyl-CoAdehydrogenase)、NCb5R3(NADH-cytochrome
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利用RACE技术从南极鱼(Dissostichus mawsoni)cDNA文库中克隆得到三个耐寒相关基因,分别命名为MsCD(Medium-chain specific acyl-CoAdehydrogenase)、NCb5R3(NADH-cytochrome b5 reductase3)和 SCD(stearoyl-CoA desaturase)。对它们进行生物信息学分析以及三者转基因烟草抗寒能力的评定,结果如下:
(1)生物信息学分析表明三个基因均与脂肪酸代谢相关。
MsCD是由1278个碱基组成,编码425个氨基酸,分子量约46 kDa,理论pI6.30。氨基酸同源性分析表明该基因与罗非鱼和安大略鲑的亲缘关系较近,与拟南芥及分支杆菌的亲缘性较远。属亲水性蛋白,没有跨膜结构域,主要定位于线粒体膜间隙。
NCb5R3是由948个碱基对组成,编码299个氨基酸,分子量约33k Da,理论pI7.72。氨基酸同源性分析表明该基因与银鳕的亲缘关系较近,与拟南芥和玉米的亲缘性较远。属亲水性蛋白,没有跨膜结构域但有膜结合部位,主要定位于细胞质基质。
SCD是由1008个碱基对组成,编码335个氨基酸,分子量约38kDa,理论pI9.06。氨基酸同源性分析表明该基因与冰鱼、斑马鱼的亲缘关系较近,与不动杆菌等微生物的亲缘性较远。属疏水性蛋白,有四个跨膜结构域,主要定位于质膜。
(2)三者转基因烟草经0℃低温处理后,表型受损程度、膜渗漏率及MDA变化量均低于GFP对照组和野生型烟草;其中,转NCb5R3基因烟草受胁迫程度最小,而转SCD基因烟草受胁迫程度最大。这表明三种与脂肪酸代谢相关基因都能在不同程度上提高烟草的耐寒性,而具体差异需要进一步研究。
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