论文部分内容阅读
我国脑中风发病率排名世界第一且已经上升为国内第一位死因,围术期发生脑中风患者的死亡率更高达60%。目前临床上治疗该疾病唯一有效的方法是溶栓治疗,但由于其纳入标准严格、治疗时间窗窄、并发症多,临床应用受到极大限制。因此寻找快速、有效、副作用小且应用广泛的预防和治疗药物,是有效控制脑缺血性损伤所亟待解决的重大课题。大量研究表明,炎症的产生是脑中风病理生理过程的主要机制之一。在应激状态下,花生四烯酸(AA)在环氧合酶-2(COX- 2)的作用下生成前列腺素H2,其最终产物前列腺素E2是明确的致炎物质。研究证实,抑制COX-2可以抑制炎症的发生发展。选择性COX-2抑制剂帕瑞昔布是非甾体抗炎药中唯一的静脉制剂,可以快速透过BBB,使用方便,符合中风急救的要求。但是帕瑞昔布治疗缺血性脑中风的实验证据较少,因此,本实验目的在于探讨其最佳治疗剂量和治疗时间窗,为进行下一步临床试验提供依据。腺苷的脑保护作用早在20年前就得到了科学验证,但是由于外源性的腺苷在血浆中的半衰期极短,有严重的心血管系统副作用,不适合用作临床治疗脑中风。最新研究表明,前列腺酸性磷酸酶(PAP)有极强的镇痛作用,其强度是同等剂量吗啡的8倍,单次鞘内给药镇痛效应可持续长达三天。Zylka等的研究提示:PAP发挥外核苷酸酶的作用,将AMP脱磷酸为腺苷,激活腺苷A1受体从而发挥镇痛作用。鉴于PAP具有在体内持续产生内源性腺苷的能力,而腺苷又具有神经保护作用,我们推测PAP具有成为新型脑保护药物的潜力。本研究采用大鼠大脑中动脉阻闭(Middle Cerebral Artery Occlusion,MCAO)模型,探讨PAP的神经保护作用,及其最佳治疗剂量和治疗时间窗。本研究的目的是:验证帕瑞昔布和PAP对围术期脑缺血再灌注损伤的预防和治疗效果,为开发预防和治疗围术期脑缺血再灌注损伤药物提供实验依据。第一部分帕瑞昔布对局灶性脑缺血损伤的保护效应目的研究帕瑞昔布对局灶性脑缺血损伤的最佳治疗剂量及有效时间窗。方法①实验一:确定最佳治疗剂量60只健康雄性SD大鼠,随机分为6组:缺血-再灌注组(I-R),溶剂组(Vehicle),Pa1,Pa2 ,Pa3和Pa4组,每组10只。采用线栓法建立局灶性脑缺血-再灌注模型,I-R组行单纯缺血-再灌注;Vehicle组在置入线栓前15min腹腔注射生理盐水;Pa1,Pa2 ,Pa3和Pa4组分别于置入线栓前15min腹腔注射5,10,20,40mg/kg的帕瑞昔布注射液。②实验二:研究治疗时间窗50只健康雄性SD大鼠随机分为5组:I-R组,T1,T2,T3和T4组,各组10只。采用线栓法建立局灶性脑缺血-再灌注模型,I-R组行单纯缺血-再灌注,T1,T2,T3和T4组分别于置入线栓前15min和置入线栓后1.5h、3.0h、6.0h各时间点腹腔注射帕瑞昔布注射液20mg/kg。以上两实验均在缺血-再灌注24h后行神经行为学评分(NBS)及断头取脑切片行10 g/L 2,3,5-氯化三苯四唑(TTC)染色,测量并计算脑梗死容积百分比。结果①Pa2和Pa3组NBS与I-R组比较有显著差异(p<0.05);Pa2 ,Pa3和Pa4组脑梗死容积百分比与I-R组比较可显著降低(p<0.05);Pa3组脑梗死容积百分比低于Pa2和Pa4组(p<0.05);Vehicle组和I-R组的NBS和脑梗死容积均无差异。②与I-R组相比,T1,T2,T3组NBS和脑梗死容积均有统计学意义。结论帕瑞昔布对大鼠局灶性脑缺血损伤具有保护效应,且该效应具有剂量依赖性,最佳治疗剂量为20mg/kg。帕瑞昔布对大鼠局灶性脑缺血损伤保护效应时间窗为缺血前至再灌注后3h。第二部分前列腺酸性磷酸酶(PAP)对局灶性脑缺血损伤的保护效应目的研究PAP对局灶性脑缺血损伤的保护效应、剂量效应关系及时间窗。方法①实验一:研究PAP对局灶性脑缺血损伤的保护效应和剂量效应关系42只雄性SD大鼠,体重250-280g,随机分为7组,即MCAO组、溶剂组(vehicle)和药物组(100mU、300mU、1000mU、3000mU和10000mU),每组6只。采用线栓法建立局灶性脑缺血损伤模型,即MCAO模型。溶剂组和药物组分别侧脑室注射10μl的生理盐水和PAP。注射时间为置入线栓前6h。②实验二:研究PAP对局灶性脑缺血损伤的治疗时间窗49只雄性SD大鼠,体重250-280g,随机分为7组,即MCAO组、置入线栓前6h(-6h)给药组、置入线栓即刻(0h)给药组和置入线栓后1.5h、3h、4.5h、6h给药组。注射剂量为实验一得出的最佳剂量,注射容量同实验一。结果①实验一神经功能学评分:神经功能学评分:PAP1000mU和3000mU组与MCAO组相比有明显的统计学差异(P<0.05);PAP100mU、300mU和10000mU组与MCAO组相比没有统计学差异。溶剂组和MCAO组之间没有明显统计学差异。脑梗死容积:PAP1000mU和3000mU组与MCAO组相比有明显的统计学差异(P<0.05);PAP100mU、300mU和10000mU组与MCAO组相比没有统计学差异(P值分别为0.42,0.34和0.79)。溶剂组和MCAO组之间没有明显统计学差异。②实验二神经功能学评分:-6h、0h、1.5h组与MCAO组相比有明显的统计学差异(P<0.05);3h、4.5h、6h组与MCAO组相比没有统计学差异。脑梗死容积:-6h、0h、1.5h组与MCAO组相比有明显的统计学差异(P<0.05);3h、4.5h、6h组与MCAO组相比没有统计学差异(P值分别为0.76,0.45和0.24)。结论PAP对大鼠局灶性脑缺血损伤具有保护效应,最佳治疗剂量为1000 mU。PAP对大鼠局灶性脑缺血损伤的神经保护时间窗为缺血前6h至缺血后1.5h。意义帕瑞昔布和前列腺酸性磷酸酶对大鼠脑缺血损伤均有预防和治疗效应,提示二者均可能成为预防围术期脑中风的侯选药物。