猪繁殖与呼吸综合征（porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS）是一种猪的重要传染病,给生猪养殖业造成了巨大的经济损失。猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRS virus,PRRSV）是PPRS的病原,是一种有囊膜的单股正链的RNA病毒,属于动脉炎病毒属。作为一种非细胞型病原,PRRSV感染过程高度依赖宿主细胞。病毒感染过程包括:结合、内化、翻译和复制、组装、释放,感染过程复杂、独特是导致病毒难以防控的重要原因。解析病毒感染机制是疫苗、抗病毒药物研制的重要理论基础。发掘参与PRRSV感染的宿主因子,有助于阐明PRRSV感染机制,为PRRS有效防控奠定基础。研究热休克蛋白8（heat shock protein member 8,HSPA8）在PRRSV感染过程中的作用,内容分为以下三个部分:第一部分HSPA8在PRRSV结合和内化过程中的作用研究研究中,首先用免疫沉淀（immunoprecipitation,IP）联合蛋白质质谱（mass spectrometry,MS）鉴定HSPA8是GP4的相互作用蛋白。随后通过GST pulldown和ELISA确定HSPA8可以和PRRSV病毒粒子相互作用。敲低HSPA8或抑制HSPA8蛋白酶活性均会显著抑制PRRSV感染。用激光共聚焦显微镜观察,HSPA8分布于宿主细胞表面,并和PRRSV共定位。抗HSPA8抗体和重组的可溶性HSPA8蛋白均能抑制PRRSV的感染,表明HSPA8参与PRRSV的结合。随后,我们还发现了HSPA8参与PRRSV的网格蛋白依赖性内吞过程,并且HSPA8可以和CD163一起支持PRRSV感染。综上所述,HSPA8在PRRSV感染早期阶段发挥重要作用,是预防和控制PRRSV感染的潜在靶点。第二部分HSPA8在PRRSV复制过程中的作用研究研究中,首先用激光共聚焦显微镜观察,在宿主细胞中,PRRSV特异性地招募HSPA8至细胞核周位置,与病毒的复制和转录复合体（replication and transcription complex,RTC）共定位。随后,抑制HSPA8蛋白酶活性,可以阻碍PRRSV RTC的形成,HSPA8参与PRRSV病毒复制。接下来,我们用RNA pulldown和RNA免疫沉淀（RNA immunoprecipitation,RIP）实验确定HSPA8可以结合PRRSV的3’UTR。3’UTR是PRRSV基因组中调控病毒复制的关键结构,本研究发现HSPA8可以调节PRRSV 3’UTR介导的基因表达。第三部分HDAC4通过HSPA8调控PRRSV复制的研究研究中,首先利用乙酰化抗体分析,发现PRRSV感染后,HSPA8蛋白乙酰化水平升高。接下来,鉴定了去乙酰化酶4（histone deacetylase 4,HDAC4）是HSPA8的去乙酰化酶。过表达HDAC4可以阻碍PRRSV RTC形成,负调节病毒3’UTR介导的基因表达,显著抑制PRRSV复制,并且依赖其去乙酰化酶活性。反过来,PRRSV感染可以下调HDAC4蛋白。以上结果说明,PRRSV通过下调HDAC4,提高HSPA8乙酰化修饰水平,促进病毒复制。综上所述,PRRSV感染过程中,HSPA8作为重要的分子伴侣蛋白,结合不同的病毒成分,参与宿主细胞对病毒感染的调控。其中,在病毒感染早期,HSPA8通过识别病毒囊膜蛋白,介导PRRSV结合和内化;在病毒进入宿主细胞后,HSPA8通过识别病毒核酸,参与PRRSV复制。此外,HDAC4通过去乙酰化HSPA8调控PRRSV复制。这些发现扩展了PRRSV感染的机制研究,为PRRS的防控提供新的理论依据。