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目的:本实验研究通过进行益气活血复方含药血清的制备和人脐静脉内皮细胞的培养与鉴定,观察含益气活血复方中药血清对toll样受体4及其下游信号的影响,以及对LOX-1、TNF-a、ICAM-1的影响。从蛋白及基因等方面研究益气活血复方的作用机制和靶点,为中医药防治AS提供理论实验依据及新思路。材料与方法:1.将20只新西兰大耳白兔随机分组,分别为空白组和中药中、低、高浓度组,每组数量为5只,共计为4组,并分别用低、中、高浓度的益气活血复方及生理盐水进行灌胃,1次/日,连续7天。在末次灌胃给药2h之后,进行心脏采血、离心、取其上清操作,再混合同组的含药血清,再用0.22μm一次性滤器进行无菌过滤,置于-80℃以留后用。2.用以健康婴儿的新鲜脐带,并置于无菌环境之中,通过胰酶消化法进行分离得出HUVECs,并在5%CO2、37℃条件,通过传代培养,并用第Ⅷ因子相关抗原鉴定。3.以LPS（1μg/ml）刺激HUVECs,活化TLR4和下游信号转导通路,再以低、中、高不同浓度的益气活血复方含药血清和阿托伐他汀进行干预,并设置空白对照组及模型组,于24h之后收集细胞。用Real time PCR方法和Western blot方法分别检测TLR4、MyD88、TRAF-6、TRAM、TRIF及NF-KB mRNA和蛋白表达。4.用LPS（1μg/ml）刺激HUVECs,激活LOX-1、TNF-a及ICAM-1,再以低、中、高不同浓度的益气活血复方含药血清和阿托伐他汀进行干预,并设置空白对照组及模型组,于24h之后收集细胞。用Real time PCR方法和Western blot方法分别检测LOX-1、TNF-a及ICAM-1 mRNA和蛋白表达。5.统计学处理:所有数据均通过运用SPSS22.0统计软件实施统计分析比较,以均数±标准差（（?）±S）进行表示,各组相互对照则运用方差分析（one-way ANOVA）,P<0.05为差异有统计学意义。结果:1.含药血清通过离心之后是淡黄色和澄清液体,每50ml血液约能得出20-25ml血清。实验共获得4组血清,即益气活血复方高浓度组含药血清、中浓度组含药血清、低浓度组含药血清和空白对照组血清。2.培养至融合状态的细胞以单层“铺路石”样排列,采用第Ⅷ因子相关抗原免疫荧光染色可知大多数细胞呈现第Ⅷ因子相关抗原阳性。3.在LPS刺激24h之后,模型组细胞TLR4与下游信号转导通路主要元件MyD88、TRAF-6及NF-κB mRNA和蛋白表达显著增高（和空白对照组进行对比P<0.01）;在通过药物干预之后,各治疗组细胞TLR4、MyD88、TRAF-6与NF-κB mRNA和蛋白显著降低,而西药对照组作用显著（与模型组进行对比P<0.01）;3个中药组均对TLR4、MyD88、TRAF-6及NF-κB mRNA和蛋白表达有明显的抑制作用（与模型组对比P<0.01或P<0.05）,于3个浓度组里其中药高浓度组的作用最佳。4.在LPS刺激24h之后,模型组细胞TLR4下游信号转导通路主要元件TRAM与TRIF mRNA及蛋白表达显著增高（与空白对照组进行对比P<0.01）;通过药物干预,各治疗组细胞TRAM和TRIF mRNA及蛋白表达没有显著降低（与模型组对比P>0.05）。5.在LPS刺激24h之后,模型组细胞LOX-1、TNF-α、ICAM-1 mRNA和蛋白表达显著增高（和空白对照组进行对比P<0.01）;通过药物进行干预,各治疗组细胞LOX-1、TNF-α、ICAM-1 mRNA及蛋白表达显著降低,其中西药对照组作用显著（和模型组对比P<0.01）;3个中药组均对LOX-1、TNF-α、ICAM-1 mRNA及蛋白表达有明显的抑制作用（与模型组对比P<0.01或P<0.05）,于3个浓度组里其中药高浓度组作用最佳。结论:1.得到具有药物浓度不等含药血清,以便于给下一步体外实验研究提供原材料。2运用胰蛋白酶消化法能够于人脐静脉中得到EC,根据人第Ⅷ因子相关抗原免疫组化法进行检测,证明实验得到的为EC。3益气活血复方能够拮抗TLR4及其下游MyD88依赖性信号转导通路主要元件MyD88、TRAF-6与NF-KBmRNA和蛋白的表达。4益气活血复方含药血清对TRAM与TRIF mRNA及蛋白表达没有显著的阻碍效果,表示益气活血复方对MyD88非依赖性信号转导通路不存在阻碍效果。5益气活血复方能够利用可阻碍LOX-1、TNF-α及ICAM-1 mRNA和蛋白的显现,降低单核细胞与VEC的粘附,有可能为AS预防治疗机理之一。而这种抑制效果需要在浓度达到一定数值之后才能够表现出来。6 LPS可激活LOX-1、TNF-α及ICAM-1 mRNA和蛋白的表达,在干预24h之后,益气活血复方能够利用可阻碍三者的显现,降低单核细胞与VEC的粘附,有可能为AS预防治疗机理之一。而这种抑制效果需要在浓度达到一定数值之后才能够表现出来。