胃癌源性外泌体对HLA-DRneg leukocytes中Dicer1、PTEN基因的调控

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目的1.通过检测观察胃癌源性的外泌体与HLA-DRneg leukocytes的关系;2.从基因和蛋白质水平分析胃癌源性的外泌体对HLA-DRneg leukocytes中Dicer1、PTEN基因表达,探讨肿瘤源性外泌体对机体免疫抑制功能的调控机制。方法1.筛选河南中医药大学第一附属医院15例确诊为胃腺癌的手术患者,收集其外周血,健康对照组16例,主要来自健康体检者,用外泌体分离试剂盒剂盒,对胃癌患者外周血的血清exosomes分离纯化;在透射电镜下,观察外泌体的形态,Westernblot对其进行鉴定;2.免疫磁珠方法分选胃癌患者外周血HLA-DRneg leukocytes;吖啶橙染色后的外泌体与CFSE染色后的HLA-DRneg leukocytes在37℃,5%,CO2条件下共培养12h后观察其状态;3.采用QRT-PCR和Westernblot方法分别检测共培养后胃癌患者与健康对照组HLA-DRneg leukocytes中Dicer1、PTEN基因和蛋白的表达。上述实验数据均重复三次,然后取其均数,实验结果以?X±S描述,采用SPSS18.0对数据进行统计处理,P<0.05有统计学意义。结果1.通过试剂盒提取成功分离胃癌患者外周血血清exosomes;透射电子显微镜下观察外泌体的形态,其由双层膜构成,多呈圆盘状,直径多在30-100nm之间;Westernblot结果显示exosomes富含四跨膜蛋白分子CD9,CD63;2.在荧光显微镜下观察到吖啶橙染为红色的的外泌体,HLA-DRneg leukocytes被CFSE染为绿色的,外泌体可以被HLA-DRneg leukocytes有效摄取;3.QRT-PCR检测结果显示胃癌患者HLA-DRneg leukocytes中Dicer1 mRNA、PTEN mRNA的相对表达量分别是健康对照组的0.46±0.19、0.48±0.27倍(P<0.05);Westernblot结果显示胃癌患者HLA-DRneg leukocytes中Dicer1、PTEN蛋白表达量,均是健康对照组Dicer1、PTEN蛋白表达量的0.15±0.11和0.33±0.19倍(P<0.05)。。结论1.外泌体表面富含的膜蛋白,可以介导细胞间的信息传递;2.胃癌源性的外泌体作为细胞间信息传递的工具可以被HLA-DRneg leukocytes所摄取,说明外泌体内的信息传递可能会影响HLA-DRneg leukocytes的表达;3.胃癌来源的外泌体在共培养后携带的有效信息可以抑制HLA-DRneg leukocytes中Dicer1、PTEN基因的表达。
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