论文部分内容阅读
目的：探索DS胎儿胚胎发育期间全基因组的miRNA表达谱特征，同时鉴别21号染色体上是否还存在新的miRNA基因。方法：收集经染色体核型分析诊断为标准核型的唐氏综合征胎儿（DS组）和匹配的正常胎儿（对照组）脐带血单个核细胞样本各6例。分别提取DS组和对照组各3例样本Total RNA等量混合，构建各自cDNA测序文库；运用Illumina Solexa高通量测序技术测序建立DS胎儿的全基因组miRNA表达谱，对结果进行生物信息学分析；并用剩余样本进行stem-loop RT-PCR验证。结果：建立了DS胎儿的全基因组miRNA表达谱，发现新miRNA基因63个，可编码58种miRNA；其中1个miRNA基因来源于21号染色体，位于“唐氏综合征关键区域”（chr21q22.2-22.3）。两组样本表达miRNA基因的染色体分布趋于一致，但表达丰度的分布却不尽相同：DS组主要分布于8、16、17和21号染色体，对照组主要分布于3、8、14、16、17和22号染色体。在DS胎儿脐带血单个核细胞中共检测到miRNA序列2208096条，代表243种miRNA；与对照组差异比较分析，有149种miRNA显著性差异表达（倍比差异>2倍和P<0.001），其中6种表达上调，143种表达下调。21号染色体编码14个miRNA，有7个表达，3个在DS组中高表达，4个低表达。对差异表达miRNA调控靶基因生物学功能分析发现，其主要与转录、基因的表达、细胞生物合成和核苷酸代谢的调节有关。值得注意的是，参与这些过程的大部分靶基因已被证明与免疫的调节有关（如：SOD1，MXD4，PBX1，BCLAF1和FOXO1）。结论：DS胎儿脐带血单个核细胞具有其特定的miRNA表达谱和染色体分布特征；异常表达的miRNA可能与DS胎儿免疫系统缺陷以及DS胎儿循环T、B淋巴细胞数目的减少有关；此外，差异显著和特异性表达的miRNA可作为DS胎儿潜在的产前筛查诊断指标。