【摘 要】
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真核表达质粒pCR3-TK由pCR3-Uni插入HSV1-TK基因构建而成.pCR3-TK中的TK基因是根据HSV-1CL101株的TK基因序列设计引物,以HSV-1Stocker株DNA为模板,通过PCR扩增的1.427Kb的DNA
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真核表达质粒pCR3-TK由pCR3-Uni插入HSV1-TK基因构建而成.pCR3-TK中的TK基因是根据HSV-1CL101株的TK基因序列设计引物,以HSV-1Stocker株DNA为模板,通过PCR扩增的1.427Kb的DNA片段.pCR3-TK经酶切和序列分析证实含完整的HSV1-TK基因.利用阳离子脂质体LipofectAMINE为载体,将pCR3-TK转染人肺腺癌Anip973细胞株,给予不同浓度的Aciclovir(ACV),经MTT检测证实了转染了TK基因的肺癌细胞对ACV的杀伤敏感性明显提高,FCM检测可以看到凋亡峰出现,且相应的S期细胞比率提高.AgNOR嗜银染色显示应用ACV的转染TK基历的细胞的增殖活性降低.结果表明:HSV-TK/ACV系统对人类肺癌具有良好的治疗作用.同时也证明阳离子脂质体LipofectAMINE对人类肺癌细胞安全、低毒,有可能成为基因治疗应用到临床实验的有价值的载体.
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