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病毒与细胞受体的结合是病毒感染的第一步,它决定病毒能否成功感染细胞,具有特别重要的意义。受体具有特异性,高度的亲和性,结合位点的有限性以及相关生物学效应等特征。识别和鉴定能与病毒特异性结合的受体,不仅有利于了解病毒的生活周期及发病机制,而且有利于制定预防和治疗措施。乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus, HBV)感染是严重威胁人类生命健康的全球性公共卫生问题。尽管目前对HBV的基因组成、复制过程、抗原结构及生物学特性等已有相当程度的了解,但由于缺乏合适的体外感染模型,对HBV感染的早期过程,如病毒如何结合靶细胞上的受体并最终进入细胞等机制,仍不清楚。目前的研究认为HBV通过病毒表面大蛋白(large surface HBV antigen,LHBs)的preS1区域识别并黏附于人肝细胞膜上的特异受体,介导病毒进入细胞,启动HBV的复制周期。因此病毒的受体是HBV进入肝细胞的门户,阻断HBV与其受体的结合是治疗乙型肝炎的重要途径之一。迄今为止,虽然报道了很多可能在HBV感染肝细胞中起受体作用的分子,但仍无法确定到底是哪种分子起关键作用。本课题主要利用基因重组技术分别采用原核表达系统和真核表达系统表达HBV preS1基因,以重组融合蛋白为配体,与生物素标记的HepG2细胞裂解液孵育,采用pull down技术和免疫共沉淀技术分离鉴定HBV的特异肝细胞膜受体。对重组preS1蛋白的免疫学性质研究结果显示融合蛋白可以与抗preS1(21-47aa)位点的特异性单抗结合并刺激免疫家兔产生高滴度的抗体,具有很好的抗原性和免疫原性;病毒捕获试验结果显示重组融合蛋白能够竞争抑制HBV病毒颗粒与抗preS1的特异抗体结合;纯化的融合蛋白能特异黏附HepG2细胞,以上研究结果表明重组preS1蛋白具有与天然蛋白类似的功能。用重组表达的preS1蛋白与HepG2细胞裂解液共孵育,采用pull down技术和免疫共沉淀技术分离鉴定HBV的肝细胞膜受体,发现分子量约为110kDa的蛋白质(p110)能特异地与HepG2细胞膜结合,该蛋白条带在作为对照的HeLa、HEK293、A549、ECV304等细胞系及小鼠原代肝细胞的相应位置不能检测到,具有组织特异性和种属特异性;用删除突变方法在大肠杆菌中分段表达preS1各区域,用表达的preS1各片段与HepG2细胞裂解液进行pull down试验,分析p110与preS1结合位点,研究结果表明该蛋白特异结合preS1(21-33aa)位点。同时本课题对二甲亚砜(Dimethyl sulfoxide, DMSO)处理HepG2细胞是否增加该蛋白的表达作了研究,结果显示DMSO并不能增加该蛋白的表达。本课题的研究结果提示p110可能是HBV感染人肝细胞过程中起关键作用的分子。为进一步研究HBV入侵肝细胞的机制打下基础。