光损伤后基质金属蛋白酶在视网膜色素上皮的表达及EPO对其的影响

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【目的】研究小鼠光损伤后视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelium,RPE)中基质金属蛋白酶(Matrix metalloproteinases)MMP-2、MMP-9和caspase-3的表达变化,探讨促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)对小鼠视网膜光损伤的治疗作用及其相关机制。【方法】60001ux弥散白光照射BALB/c小鼠,建立小鼠视网膜色素上皮细胞光损伤的动物模型。将52只BALB/c小鼠随机分为对照组,单纯光照组和EPO预处理组,并将后两组动物在自制光照箱中连续光照4小时,应用光镜,HE染色法观察各组小鼠视网膜组织形态学的改变,应用免疫组织化学方法检测各组小鼠视网膜组织中MMP-2、MMP-9和caspase-3的表达变化。【结果】(1)苏木素伊红染色发现,单纯光照组早期表现为RPE细胞水肿,排列疏松,形态不规则,随着光照后时间的推移,出现RPE细胞的丢失表现,并最终导致RPE细胞的调亡;EPO治疗组RPE组织学改变较晚发生且不明显,凋亡细胞数减少。(2)MMP-2免疫组织化学显示,正常RPE层MMP-2低表达,单纯光照36h后,RPE层可观察到大量MMP-2棕黄色阳性表达,且此时表达达到最高峰;同一时间段EPO处理组与单纯光照组相比较,阳性表达均明显下降,差别有统计学意义(P<0.01)(3)MMP-9免疫组织化学显示,正常RPE中几乎无MMP-9蛋白表达,单纯光照后6h,MMP-9即开始表达,颜色由浅黄至棕黄色,主要表达于胞浆中,12h达到高峰并维持高表达状态,96h后出现递减趋势;EPO处理组MMP-9表达趋势同单纯光照组,但各时段MMP-9的表达均呈下降趋势,差别有统计学意义(P<0.01)(4)caspase-3免疫组织化学显示,正常RPE不表达caspase-3,单纯光照后各亚组均可见caspase-3阳性表达细胞,且随时间的推移阳性表达呈递增趋势,并于光照后96h阳性细胞数最多;与EPO预处理组相比较,仅光照后96h有少量caspase-3阳性表达,两组同时间段相比较差别有统计学意义(P<0.01)。【结论】MMP-2、MMP-9参与了视网膜光损伤机制,并最终导致RPE细胞的凋亡,推测EPO可能通过抑制MMP-2、MMP-9和caspase-3的表达来发挥对视网膜的保护作用。
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