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嵌合抗原受体（chimeric antigen receptor，CAR）由一个scFv(single chain variablefragment)单链抗体可变区片段（由抗体VH氨基酸序列和VL区氨基酸序列经Linker连接而成），通过铰链结构与源于TCR复合体或者IgE高亲和受体的跨膜和胞内信号结构域（源CD3ζ/FcεRIγ免疫受体酪氨酸活化基序、源自CD28/4-1BB/OX40/ICOS/DAP10/LCK共刺激信号分子胞内结构域）连接构成。经CAR遗传修饰的T细胞（简称CAR-T），能够高效识别和杀伤由于MHC分子或抗原加工相关蛋白酶体低表达、逃逸TCR介导免疫反应的肿瘤细胞。MUC1（Mucin1，黏蛋白1）是一种大分子跨膜糖蛋白，广泛高表达于乳腺癌、卵巢癌、肺癌、前列腺癌、结肠癌、肝癌和胰腺癌等恶性肿瘤，它的胞外区主要由20个氨基酸（PDTRPAPGSTAPPAHGVTSA）的核心重复序列组成，是MUC1蛋白糖基化修饰位点，且相对于正常细胞，肿瘤细胞表面MUC1具有不同的糖基化结构。过表达和糖基化异常都使MUC1成为各种免疫治疗的理想靶点。本课题中我们以MUC1作为免疫靶点，分别构建第一代与第三代靶向MUC1的CAR基因表达框（MUC1-CAR和G3MUC1-CAR），并将其装入慢病毒载体，利用获得的重组慢病毒感染Jurkat细胞，通过CCK-8法、ELISA法、乳酸脱氢酶释放实验，分别检测在MUC1抗原存在条件下，CAR-T细胞的增殖、IL-2分泌量、杀伤作用。实验中我们成功构建两种靶向MUC1嵌合抗原受体表达框、重组慢病毒、Jurkat CAR-T细胞株。两种经MUC1嵌合抗原受体修饰的Jurkat CAR-T细胞均能特异识别MUC1分子，杀伤MUC1高表达的肝癌细胞QGY-7701，而对MUC1低表达的正常肝细胞L02基本不杀伤；相对于第一代CAR，第三代CAR修饰的JurkatT细胞接触MUC1分子后，其增殖速度、IL-2分泌量和杀伤效率均显著优于第一代MUC1修饰细胞（MUC1-CAR）。本课题研究结果表明：靶向MUC1的Jurkat CAR-T细胞能特异杀伤MUC1高表达的肝癌细胞，为应用MUC1-CAR修饰的患者原代T细胞用于肝癌过继性免疫细胞治疗的研究提供了可靠实验依据。