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新生儿坏死性结肠炎(Neonatal necrotizing enterocolitis,NEC)是早产儿和低出生体重婴儿高发的病症,且具有很高的致死率,常会导致胃胀气、胃潴留、肠积气、呕吐、便血等病症,严重会出现肠坏死、肠穿孔、休克,没有有效的预防和治疗方法,近年来医生和学者研究了各种预防和治疗的手段,其中微生态制剂是一个研究热点。乳酸菌是人体肠道中常见的益生菌,可以帮助新生儿快速建立起肠道菌群,抑制致病菌的繁殖,调节机体免疫,从而减少NEC的发病几率以及危险性。S-层蛋白是乳酸菌表面的一种蛋白分子,分子量在25～71kDa之间,等电点9.35～10.04之间。现已知道S-层蛋白在乳酸菌定植肠道上起到了重要的作用,还可以抑制病原菌对肠道的黏附及入侵,但有关S-层蛋白抑制肠上皮细胞凋亡很少有研究。本实验通过对新生SD大鼠缺氧及冷刺激,诱发NEC炎症,利用嗜酸乳杆菌和用LiCl处理的嗜酸乳杆菌进行预防和干预,探究嗜酸乳杆菌在NEC的作用以及S-层蛋白在其中的可能的影响。另外以Caco-2细胞模型为基础,利用TNF-α诱导其凋亡,研究S-层蛋白在其过程中的作用,初步探究S-层蛋白对免疫调控的作用。首先,成功建立大鼠NEC模型,通过对比造模组与正常组的体重发现嗜酸乳杆菌可以促进新生大鼠的生长发育。HE染色结果表明喂养嗜酸乳杆菌(去S-层嗜酸乳杆菌)后,NEC的发病严重性明显改善,其病理学评分降为2.06、2.20。透射电镜的结果表示,嗜酸乳杆菌对NEC有很好的预防和治疗的效果。其次,嗜酸乳杆菌可以有效的降低肠上皮细胞的凋亡率,减少TNF-α、IL-6的生成,增加IL-8的产生,通过析因方差分析得出嗜酸乳杆菌的S-层蛋白参与了抑制NEC发病的过程,并且在其中减少了 TNF-α的生成。然后,Sephadex G-75纯化嗜酸乳杆菌S-层蛋白最优条件为:洗脱液pH 9.5,洗脱液流速1.5mL/min,上样浓度0.5mg/mL,上样体积6mL。最后,Caco-2细胞模型实验表明S-层蛋白是嗜酸乳杆菌的重要黏附素,当S-层蛋白黏附在Caco-2细胞后,嗜酸乳杆菌没有足够的位点黏附,黏附率下降79.93%。在Caco-2细胞凋亡时,加入S层蛋白可以明显的减少其凋亡率,检测发现S-层蛋白减少IL-6的生成,增加IL-8的产生,再加入LPS之后可以有效的抑制caspase-3的产生。