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研究目的与背景多发性硬化(Multiple Sclerosis,MS)是一种以多发病灶和缓解复发的病程为临床特点的中枢神经系统(Central Nervous System,CNS)脱髓鞘性疾病。目前,MS的确切病因及发病机制尚不十分明确,目前较公认的观点认为MS可能是遗传易感性的个体与环境因素的相互作用而发生的CNS自身免疫性疾病,因此自身免疫可能是其主要的致病机制。而细胞因子(cytokine,CK)在启动、维持和调节组织特异性自身免疫损伤等方面发挥着重要的作用。近年越来越多的研究致力于探讨CK与自身免疫性疾病的关系。大量的研究表明CK在MS及其动物模型实验性自身免疫性脑脊髓炎(Experimental Autoimmune Encephalomyelitis,EAE)的免疫致病过程中发挥着重要的作用。研究认为促炎性的细胞因子和抑炎性的细胞因子通过改变Th1/Th2型细胞之间的平衡影响着自身免疫性疾病的发展和临床转归。白细胞介素-33(Interleukin-33,IL-33)是近年来新发现的IL-1超细胞因子超家族中的成员之一。IL-33具有多种免疫效应,主要参与Th2细胞介导的免疫应答以促进炎症反应的发生,调节肥大细胞的功能及调节Th1/Th2免疫应答之间的平衡。最近有研究报道,IL-33与EAE的发生相关,提示IL-33作为促炎性细胞因子在中枢神经系统脱髓鞘性疾病中的病理生理学改变和功能可能发挥主要的作用。白细胞介素-35(Interleukin-35,IL-35)是最新发现的IL-12超家族成员之一。IL-35能够通过促进调节性T细胞(Regulatory T cells,Tregs)的增殖、增强Tregs的免疫抑制作用、抑制Th17细胞的分化及促炎性细胞因子IL-17等的产生而发挥免疫抑制的作用。在研究EAE动物模型中发现,由于2D2TCR和C57BL6转基因的小鼠缺乏EBI3基因,从而加重了髓鞘少突胶质细胞糖蛋白肽段免疫所致的EAE的临床症状(尽管临床症状只是轻微的加重)。提示IL-35作为抑炎性细胞因子在中枢神经系统脱髓鞘性疾病中的病理生理学改变和功能也可能发挥主要的作用。本研究通过测定复发-缓解型MS患者血清中IL-33、IL-35的浓度,对IL-33、IL-35在复发-缓解型MS患者病程中可能发挥的作用做一初步探讨,旨在为MS的免疫治疗提供进一步依据。同时采用扩展残疾状况评分量表(Expanded Disability Status Scales,EDSS)评价MS患者的神经功能缺损程度。资料与方法收集2011年7月至2013年3月期间在我院神经内科住院的复发-缓解型MS患者32例,男性14例,女性18例,年龄16-58岁,平均(37.38±13.37)岁。所有入选的MS患者均经过我院神经内科两名以上神经医师通过病史及相关检查而诊断,均符合2010年McDonald的诊断标准,为临床确诊病例,并对所有受试者进行EDSS评分来判断神经功能缺损程度。正常对照组成员为2011-2013年在我院门诊体检中心检查的30例健康志愿者(Healthy Control,HC),男性14例,女性16例,年龄16-58岁,平均年龄(36.03±11.92)岁,均无感染、过敏性、自身免疫性疾病、肿瘤和肝肾肺部疾病。所有受试者抽血前3月内未应用激素及免疫抑制剂。各组研究对象在性别、年龄方面匹配,差异无统计学意义。本研究所有受试者均被告知实验目的,同时征得其同意并在知情同意书上签字后进行。所有受试者采血前均需禁食10小时以上,于当天清晨空腹抽取肘静脉血3ml于无抗凝剂的真空采血管中。MS组患者在疾病的复发期(14d之内)和缓解期(30-60d)内分别采集静脉血液标本。采用双抗体夹心酶联免疫吸附方法(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)测定血清中IL-33和IL-35的浓度。采用SPSS17.0统计软件分析数据,定量资料以均数±标准差(x±s)表示。两独立样本间的比较采用两独立样本的t检验,多组间均数比较采用单因素方差分析,每组之间的两两比较采用LSD检验。检验水准均设为0.05。结果1.MS患者复发期血清IL-33水平(597.51±79.89)ng/1较缓解期(495.57±90.85)ng/1及对照组(428.57±70.91)ng/1升高,P=0.000。MS患者缓解期血清IL-33水平虽有所下降,但仍较对照组升高,P,=0.002。2.MS患者缓解期血清IL-35水平(55.78±10.66)ng/1较复发期(46.31±10.97)ng/1及对照组(40.34±8.86)ng/1升高,P=0.000；MS患者复发期血清IL-35水平虽较缓解期有所降低,但仍高于对照组,P=0.024。3.MS复发期与缓解期两组间EDSS评分比较有显著性差异(P<0.05)。结论1.MS患者复发期与缓解期血清IL-33水平均较对照组明显升高,提示IL-33在MS的免疫致病过程中发挥作用。并且MS患者复发期血清IL-33水平较缓解期升高更显著,提示IL-33可能主要在免疫效应阶段的早期发挥作用并参与MS的发病,可能发挥免疫启动的作用。2.MS患者复发期与缓解期血清IL-35水平均较对照组明显升高,提示IL-35在MS的病程中发挥作用。并且MS患者缓解期血清IL-35水平较复发期升高更显著,提示IL-35可能主要在疾病的缓解期参与MS的修复过程,发挥免疫抑制作用,抑制病情的进展。