微波消融治疗肝癌的临床应用

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第一部分丝素蛋白/骨形态发生蛋白2活性肽的制备及生物学活性研究目的:将丝素蛋白及骨形态发生蛋白2活性氨基酸序列结合,制备丝素蛋白/骨形态发生蛋白2活性肽(SF/BMP2活性肽),并研究其促干细胞定向分化的活性。方法:用固相多肽合成法制备丝素蛋白/骨形态发生蛋白2活性肽,以明胶海绵作为支架材料,将复合SF/BMP2活性肽的浸出液与骨髓间充质干细胞(BMSCs)共培养,CCK-8法观测细胞的增殖生长情况;胰酶消化与骨髓间充质共培养2周后的细胞,行茜素红染色及碱性磷酸酶染色(ALP)观察促骨髓间充质干细胞定向分化的能力。结果:利用固相多肽合成法成功制备丝素蛋白/骨形态发生蛋白2活性肽,SF/BMP2活性肽浸出液对细胞的生长增殖与正常培养组比较无统计学差异(P>0.05);经茜素红及ALP染色染色发现,骨髓间充质干细胞经活性肽诱导后表达成骨细胞特征。结论:丝素蛋白/人骨形态发生蛋白2活性肽对细胞的生长增殖无影响,可以诱导骨髓间充质干细胞向促成骨方向分化,可以作为组织工程骨中的细胞活性因子。第二部分 丝素蛋白/骨形态发生蛋白2活性活性肽的异位成骨能力研究目的:制备丝素蛋白/骨形态发生蛋白2活性肽,研究丝素蛋白/骨形态发生蛋白2活性肽的载药释放规律和大鼠大腿肌袋异位成骨活性,为此后的实验提供理论基础。方法:BCA法测定不同时间点SF/BMP2活性肽溶液中SF/BMP2活性肽浓度,记录支架载药率,计算累积释放量。用明胶海绵作为支架材料,将单纯明胶海绵及SF/BMP2活性肽/明胶海绵、BMP-2/明胶海绵分别植入24只大鼠大腿肌袋,单纯明胶海绵组为对照组。术后4周、6周行CT检测,处死大鼠,切除植入材料的周围组织,HE染色后行组织学观察。结果:丝素蛋白/骨形态发生蛋白2活性肽释放曲线符合缓释药物规律;CT检测异位成骨可见异位骨组织形成,组织形态学观察见实验组有成骨细胞形成。结论:丝素蛋白/骨形态发生蛋白2活性肽载药率良好,药物释放具有一定的缓释效用,具有一定的促SD大鼠异位成骨作用。
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