基因工程菌高密度发酵中外源蛋白质的表达

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大肠杆菌与毕赤酵母是基因工程中常用的宿主菌,许多有价值的多肽和蛋白在其中已成功地行了表达。重组DNA技术和大规模培养技术的有机结合,使原来无法大量获得的天然蛋白质能大量生产。本文研究了,重组人B淋巴细胞刺激因子(hBLyS).甘油脱水酶B1亚基与谷胱苷肽的融合蛋白(dhaB1-GST)在大肠杆菌中的表达;重组根霉脂肪酶前肽基因在毕赤酵母中的表达。本文研究了乳糖代替IPTG在重组大肠杆菌高密度发酵中诱导表达重组人B淋巴细胞刺激因子(hBLyS),结果表明,乳糖不仅能够作为诱导剂诱导外源蛋白的合成,而且能作为碳源促进菌体的生长.通过对培养策略与诱导条件进行优化,最终在5L发酵罐中乳糖诱导外源蛋白的表达量约占菌体总蛋白的20.9%,同时生物量达到OD600=57,接近IPTG在摇瓶中的的诱导水平(26%)。本文还对不同的诱导条件对甘油脱水酶B1亚基与谷胱苷肽的融合蛋白(dhaB1-GST)在重组大肠杆菌中的可溶行表达进行了研究了。在考察了,不同的诱导剂与诱导剂用量,不同诱导温度对融合蛋白表达可溶性的研究。在最佳条件下(22mM乳糖诱导,30℃)融合蛋白的全蛋白表达量达到14%,并且几乎全部以可溶形式存在(可溶性表达量为13%)。本文还着重研究了重组根霉脂肪酶基因(RAL)在毕赤酵母中的表达,将重组根霉脂肪酶前肽基因(Pro-RAL)或成熟肽基因(m-RAL)通过电转化导入毕赤酵母中,然后通过筛选得到2株高产重组毕赤酵母,在摇瓶中根酶脂肪酶的活性均达到了1.5U ml-1。通过优化培养条件与甲醇诱导条件:采用基础盐培养基(BSM),通过通入纯氧提高诱导后发酵液的溶氧水平,采用甲醇在线分析仪控制甲醇的流加速度,加入酸水解干酪素降低毕赤酵母自身分泌的蛋白酶对外源蛋白的水解作用,最终在5L发酵罐中,重组脂肪酶的活性达到88.2U ml-1。
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