禽流感(Avian Influenza，AI)是由A型流感病毒引起禽类的一种急性，烈性传染病，它的流行与暴发给养禽业造成了巨大的经济损失。寻找安全有效的AIV疫苗是众多学者研究的热点，近年来随着基因工程的研究进展，基因工程疫苗已经成为防治该病的主要手段。 本研究根据GenBank已经发表的H5N1亚型禽流感病毒(Aivan influenza virus，AIV)具有免疫原性的血凝素(haemagglutini，HA)基因和神经氨酸酶(neuraminidase，NA)基因序列，设计合成引物，利用RT-PCR方法扩增出了HA和NA基因，将其克隆于表达质粒Tmd-CMV-IRES-EGFP中，从而得到新的质粒Tmd-CMV-HA-IRES-NA-EGFP，使HA和NA基因位于含细胞巨化病毒(CMV)早期启动子的调控下，并与增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)串联。 从感染火鸡疱疹病毒(Turkey herpesvirus，HVT)的次代鸡胚成纤维细胞(CEF)中提取病毒总基因组，选择病毒的非必须区US10区为外源片段的插入区域，根据GenBank已经发表的US10区基因序列，分别设计同源臂两侧的引物，以HVT的总基因组为模板用PCR的方法获得US101和US102片断。按照PMD18-T载体的说明将US101和US102分别克隆到PMD18-T载体中，从而得到新的质粒PMD18-T-US101和PMD18-T-US102.将质粒PMD18-T-US101和PMD18-T-US102分别用限制性内切酶BamHI和EcoRI酶切，将US101克隆于PMD18-T-US102中，从而得到新的质粒命名为pUS10. 将上述质粒Tmd-CMV-HA-IRES-NA-EGFP和pUS10用限制性内切酶StuⅠ和BssHⅡ酶切，将串联基因CMV-HA-IRES-NA-EGFP插入到HVT基因的非必需区(US10)中，从而构建了带标记的重组转移质粒并命名为pUS10-CMV-HA-IRES-NA-EGFP.将该转移载体质粒与感染HVT的鸡胚成纤维细胞(CEF)中提取的全细胞DNA，利用脂质体转染的方法共同转染次代CEF，待病毒蚀斑出现后，铺营养琼脂进行培养，利用挑斑和有限稀释的方法筛选带有绿色荧光的病毒蚀斑，进行数轮蚀斑纯化，经荧光和PCR初步鉴定获得了重组火鸡疱疹病毒。 本实验运用回收，转化，质粒提取等多种分子生物学实验技术获得了表达禽流感HA和NA基因的重组火鸡疱疹病毒，为今后禽流感基因工程苗的研究奠定了坚实的基础。