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目的:脑出血是发病率、致残率和病死率均较高的一类脑血管病。国内外研究已证实骨髓间充质干细胞可以通过多种机制促进实验性脑出血大鼠的神经功能恢复,从而达到治疗效果。随着研究的深入,我们发现microRNA与脑出血疾病的功能恢复也有着一定的关系。前期研究表明,miR-107在脑出血患者外周血中下调。目前已发现miR-107在阿尔兹海默病、缺血性心脑血管病、胶质瘤等多种肿瘤中呈差异性表达,发挥了不同作用,但其在脑出血中的具体作用尚不明确。因此本实验通过转染人工合成的rno-miR-107至骨髓间充质干细胞,在体外模拟脑出血病理状态,观察转染后的干细胞其血管内皮生长因子的表达变化和与之共培养的大鼠脑血管内皮细胞的增殖能力的改变,可能为今后骨髓间充质干细胞治疗脑出血提供新的理论方向。方法:体外培养大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)和大鼠脑微血管内皮细胞(RBMECs)并在模拟的大鼠脑出血细胞模型下进行研究。首先在常氧条件下将人工合成的rno-miR-107mimics、inhibitor、Nc转染至BMSCs中,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测基因的转染情况。进一步体外模拟脑出血条件,应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测基因转染后的BMSCs分泌血管内皮生长因子(VEGF)的表达变化。最后将转染后的BMSCs与RBMECs transwell共培养,利用Western-blot法和CCK-8检测RBMECs的VEGF表达改变和增殖能力变化。结果:1、在常氧条件下,本实验对未转染组(Control组)、转染rno-miR-107negative control的BMSCs(Nc组)、转染rno-miR-107 mimics的BMSCs(mimics组)和转染rno-miR-107 inhibitor的BMSCs(inhibitor组)进行qRT-PCR测定基因的转染效率。结果发现:与Nc组相比,mimics组的细胞中miR-107表达明显增多,inhibitor组的细胞中miR-107表达明显降低,并且三者中的两两组间差异具有统计学意义(P<0.05)。与Control组相比,Nc组的细胞miR-107表达没有明显差异(P>0.05)。成功建立了miR-107过表达和沉默的BMSCs模型。2、成功模拟脑出血体外细胞模型,即糖氧剥夺(OGD)4小时和hemin(10uM)共同条件,利用qRT-PCR检测转染后的BMSCs中VEGF mRNA的表达,同时利用Western blot检测各组细胞中VEGF蛋白的表达。结果显示:与Nc组相比,mimics组中VEGF的mRNA和蛋白表达量均增多,inhibitor组中VEGF的mRNA和蛋白表达量均减少,且三者中两两组间差异具有统计学意义(P<0.05)。与Control组相比,Nc组的细胞VEGF表达没有明显差异(P>0.05)。提示过表达miR-107可使BMSCs分泌VEGF增多,沉默miR-107可使BMSCs分泌VEGF减少。3、将BMSCs与RBMECs在体外脑出血模型下进行transwell共培养,将实验分为五组,即RBMECs组(没有共培养BMSCs,只有RBMECs)、RBMECs+Control-BMSCs组(与RBMECs共培养的为未转染组BMSCs)、RBMECs+mi R-107Nc-BMSCs组(与RBMECs共培养的为转染rno-miR-107 negative control的BMSCs)、RBMECs+miR-107 mimics-BMSCs组(与RBMECs共培养为转染rno-mi R-107mimics的BMSCs)和RBMECs+miR-107 inhibitor-BMSCs组(与RBMECs共培养的为转染rno-miR-107 inhibitor的BMSCs)。利用Western blot检测RBMECs的VEGF的表达变化。结果发现:与RBMECs组相比,其他与BMSCs共培养的四组表达的VEGF均明显增多(P<0.05)。与BMECs+miR-107 Nc-BMSCs组相比,与过表达miR-107共培养的RBMECs表达的VEGF增多,与沉默miR-107共培养的RBMECs表达VEGF减少,且三者中两两组间差异具有统计学意义(P<0.05)。与RBMECs+Control-BMSCs组相比,Nc组的VEGF表达无明显差异(P>0.05)。4、相同的共培养体系(如3),利用CCK-8检测RBMECs的增殖能力。结果发现:与RBMECs组相比,其他与BMSCs共培养的四组增殖能力均增强(P<0.05)。与BMECs+miR-107 Nc-BMSCs组相比,mimics组的RBMECs细胞增殖能力增强,inhibitor组则减弱,且三者中两两组间差异具有统计学意义(P<0.05)。与RBMECs+Control-BMSCs组相比,Nc组的细胞增殖能力无明显差异(P>0.05)。结论:1、在模拟的脑出血体外条件下,miR-107过表达可使BMSCs分泌VEGF能力增强。2、将BMSCs与RBMECs在脑出血体外条件系统中共培养,共培养BMSCs的RBMECs组要比只有RBMECs的空白组表达的VEGF增强;与miR-107过表达的BMSCs共培养的RBMECs其VEGF表达能力和细胞增殖能力均增强。